[發(fā)明專(zhuān)利]一種人染色體P16基因檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110382722.4
• 申請(qǐng)日: 2009-05-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102517382A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李明;何瑰;陳娟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種人染色體P16基因檢測(cè)試劑盒。具體地，所述檢測(cè)試劑盒包括用于P16基因檢測(cè)的探針和雜交緩沖液。應(yīng)用本發(fā)明的人染色體P16基因檢測(cè)試劑盒可以對(duì)人染色體P16基因異常進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)。

背景技術(shù)

P16基因又叫MTS1(multiple?tumor?suppressor?1，也稱(chēng)多腫瘤抑制基因)或CDKN2A基因，1994年被鑒定，定位于人染色體9p21.3，所編碼的產(chǎn)物為一種細(xì)胞蛋白依賴性激酶(CDKS)抑制蛋白，它通過(guò)p16?INK4αcyclin?D1-PRb通路維持機(jī)體細(xì)胞的有序增殖，直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分裂。P16基因純合子的缺失往往導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，

在人類(lèi)約50％腫瘤細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)P16純合子缺失、突變異常，提示P16基因可能是9p21區(qū)域的候補(bǔ)腫瘤抑制基因，它與腫瘤的發(fā)生有著十分密切的關(guān)系。P16基因已經(jīng)在肺癌、乳腺癌、宮頸癌、食管癌、腦腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌、淋巴瘤和黑色素瘤中發(fā)現(xiàn)純合子缺失、蛋白過(guò)表達(dá)以及無(wú)義，錯(cuò)義及移碼突變[Kaye?FJ.RB?and?cyclin?dependentkinase?pathways：defining?a?distinction?between?RB?and?p16?loss?in?lung?cancer[J].Oncogene，2002，21(45)：6908-6914.][Bazan?V，ZannaI，Migliavacca?M，et?al.Prognosticsignificance?of?p16INK4a?alterations?and?9p21?loss?of?heterozygosity?in?locallyadvanced?laryngeal?squamous?cell?carcinoma[J].J?Cell?Physiol，2002，192(3)：286-293.][Yoshida?S，Todoroki?T，Ichikawa?Y，et?al.Mutations?ofp16Ink4/CDKN2and?p15Ink4B/MTS2?genes?in?biliary?tract?cancers[J].Cancer?Res，1995，55(13)：2756-2760.][Calero?Moreno?TM，Gustafsson?G，Garwicz?S，et?al.Deletionof?the?Ink4-locus(the?p16ink4a，p14ARF?and?p15ink4b?genes)predicts?relapse?inchi?ldren?with?ALL?treated?according?to?the?Nordic?protocols?NOPHO?86?and?NOPHO?92[J].Leukemia，2002，16(10)：20372045.]，表明P16基因以缺失、擴(kuò)增、突變等方式廣泛參與腫瘤形成，檢測(cè)P16基因狀態(tài)有無(wú)改變對(duì)判斷患者腫瘤的易感性、進(jìn)行高危病例篩選以及預(yù)測(cè)腫瘤的預(yù)后，具有十分重要的臨床意義。

染色體核型分析可以進(jìn)行染色體異常分析，目前廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞中染色體及基因異常檢測(cè)。但核型分析需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、制備高質(zhì)量的中期染色體。其檢測(cè)結(jié)果常受培養(yǎng)失敗，染色體形態(tài)不佳等因素影響。

免疫組化方法利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量研究。目前主要用于組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本的檢測(cè)。該方法常用于蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)，但該方法易受檢測(cè)者的主觀影響，結(jié)果偏差大。

熒光原位雜交方法利用堿基互補(bǔ)原理，通過(guò)分子雜交對(duì)已知基因或序列的染色體進(jìn)行定位及染色體畸變的研究。在基因定性、定量、整合、表達(dá)等方面的研究中頗具優(yōu)勢(shì)。熒光原位雜交技術(shù)因其操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好、靈敏度特異性高、檢測(cè)時(shí)間相對(duì)較短、檢測(cè)靶區(qū)域范圍廣，可同時(shí)用于間期和中期細(xì)胞檢測(cè)而被廣泛應(yīng)用于基因異常的檢測(cè)。

檢索后發(fā)現(xiàn)，針對(duì)檢測(cè)樣本的差異，臨床使用方法也存在較大區(qū)別。例如，在血液病中P16基因的檢測(cè)常使用核型分析或/和熒光原位雜交方法；針對(duì)實(shí)體腫瘤，如宮頸癌、食管癌等中蛋白表達(dá)水平檢測(cè)常使用免疫組化方法；針對(duì)脫落細(xì)胞，如膀胱癌的檢測(cè)中常使用熒光原位雜交方法。

用于P16基因檢測(cè)的商品化熒光原位雜交探針?lè)N類(lèi)少，通過(guò)比較部分商品化探針發(fā)現(xiàn)，探針長(zhǎng)度從100Kb～400Kb不等。眾所周知，探針長(zhǎng)度會(huì)直接影響雜交信號(hào)強(qiáng)度，但同樣的，探針過(guò)長(zhǎng)也會(huì)造成高背景，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。