[發明專利]一種1號染色體替換實驗小鼠品系C57BL/6-Chr1AKR的構建

有效

• 申請號: 201110379644.2
• 申請日: 2011-11-24
• 公開（公告）號: CN103125446A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 趙瑩;趙麗亞;劉磊;邢正弘;陳國強;肖君華
• 申請（專利權）人: 上海西普爾-必凱實驗動物有限公司;東華大學
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術領域

本發明屬小鼠品系的構建領域，特別是涉及構建一種1號染色體替換實驗小鼠品系C57BL/6-Chr1^AKR。

背景技術

現有近交系小鼠祖先來源單一，同一基因座位等位基因數量少，而在自然群體中導致復雜性狀差異的等位基因卻非常豐富，目前用小鼠定位復雜性狀相關基因的經典方法是將具有特定性狀差異的不同小鼠品系雜交，初步定位QTL，該過程一般需要6個月左右時間，定位區段長度為40-cM左右。但接下來構建同類系，進行基因精細定位將QTL區段縮小到1cM(平均包含基因約10-20個左右)往往需要幾年時間。而進一步縮小QTL區段需依靠反復回交或者自交發生染色體重組，過程極其艱辛。染色體替換系是解決復雜性狀相關基因初步定位的最佳資源。研究者僅需要將構建好的染色體替換系直接與受體品系比較，便可明確知道該染色體是否參與性狀調控。但由于染色體替換品系構建上存在技術難度，近交系AKR還未被引進受體品系C57BL/6小鼠基因組中。

C57BL/6是近交系中使用最廣泛的品系，第一個高質量的小鼠基因組序列草圖是通過C57BL/6繪制的。其基因信息明確、生育力強，廣泛應用于重大疾病的研究。具有以上優勢，C57BL/6小鼠是染色體替換研究的最佳背景之一。

AKR品系小鼠的主要特性：①為高發白血病株小鼠，雌雄鼠淋巴細胞白血病發生率可達68％-90％。②對Graff白血病因子敏感。③腎上腺類脂質(類固醇)濃度低。④血液過氧化氫酶活性。

鑒于C57BL/6小鼠基因信息明確，有必要以之作為背景，通過染色體替換試驗，來研究AKR小鼠各染色體及其上的基因的功能，因此克服技術難度以獲得引進了AKR小鼠染色體的C57BL/6小鼠品系是首要的。

發明內容

本發明的目的在于構建一種染色體替代實驗小鼠品系C57BL/6-Chr1^AKR。

在本發明的第一方面，提供一種1號染色體替換實驗小鼠品系C57BL/6-Chr1^AKR的建立方法，所述方法包括：

(1)以AKR品系小鼠作為母本、C57BL/6品系小鼠作為父本進行雜交，獲得F1代小鼠(包括雄性小鼠和雌性小鼠)；

(2)將F1代雄性小鼠與C57BL/6品系雌性小鼠雜交，獲得回交一代小鼠；該回交小鼠中，AKR品系小鼠中的性染色體和線粒體DNA被替換為C57BL/6品系小鼠中的性染色體和線粒體DNA；使用多核苷酸多態性(SNP)位點鑒定該雄性回交小鼠的1號染色體，選擇1號染色體多核苷酸多態性位點鑒定結果為AKR品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串聯重復序列(STR)位點鑒定選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號染色體短串聯重復序列位點鑒定結果為AKR品系小鼠所特有的回交小鼠；

(3)將選擇到的雄性回交小鼠與C57BL/6品系雌性小鼠雜交，獲得下一代回交小鼠；

(4)使用多核苷酸多態性(SNP)位點鑒定雄性回交小鼠的1號染色體，選擇1號染色體多核苷酸多態性位點鑒定結果為AKR品系小鼠所特有的雄性回交小鼠；使用短串聯重復序列(STR)位點鑒定選擇到的雄性回交小鼠，選擇1號染色體短串聯重復序列位點鑒定結果為AKR品系小鼠所特有的回交小鼠；

(5)重復步驟(3)～(4)5-50次(例如：8、9、10、15、20、30、40次)；從而獲得染色體替代動物品系，其以C57BL/6品系小鼠為背景，且其1號染色體被AKR品系小鼠的1號染色體替換。

在一個優選例中，所述的1號染色體的多核苷酸多態性位點(參見MGI數據庫中，記載了兩個品系的多核苷酸多態性位點信息，http://www.informatics.jax.org/javawi2/servlet/WIFetch？page＝snpQF)包括：

rs30719154，其在1號染色體上所處位置為chr1：3052360；在AKR品系小鼠染色體相應位置的堿基為G，在C57BL/6品系小鼠染色體相應位置的堿基為T；

rs31426703，其在1號染色體上所處位置為chr1：12720994；在AKR品系小鼠染色體相應位置的堿基為C，在C57BL/6品系小鼠染色體相應位置的堿基為T；

rs31928308，其在1號染色體上所處位置為chr1：28659508；在AKR品系小鼠染色體相應位置的堿基為A，在C57BL/6品系小鼠染色體相應位置的堿基為G；