[發(fā)明專(zhuān)利]女性雌激素敏感性毒副作用易感基因無(wú)創(chuàng)檢測(cè)試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110379138.3
• 申請(qǐng)日: 2011-11-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102433380A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘加奎;姜麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 解碼(上海)生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體涉及一種女性雌激素敏感性毒副作用的易感基因檢測(cè)試劑盒，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果從基因?qū)用嬖u(píng)估女性雌激素代謝方面的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別，并作為更年期雌激素的用藥指導(dǎo)。

背景技術(shù)

更年期指女性卵巢功能從旺盛狀態(tài)逐漸衰退到完全消失的一個(gè)過(guò)渡時(shí)期，包括絕經(jīng)和絕經(jīng)前后的一段時(shí)間。進(jìn)入更年期是女性的一個(gè)特殊階段，受到生物、心理和社會(huì)因素的影響，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，卵巢功能衰退、性激素分泌減少、促性腺激素升高以及不適應(yīng)機(jī)體內(nèi)分泌的重新調(diào)整而引起植物神經(jīng)功能紊亂是導(dǎo)致絕經(jīng)期綜合征發(fā)病的主要原因。科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，雌激素受體廣泛分布在女性全身組織和器官的細(xì)胞膜上，當(dāng)雌激素減少時(shí)，這些組織和器官就會(huì)發(fā)生退行形變或代謝上的變化，進(jìn)而出現(xiàn)一系列神經(jīng)、內(nèi)分泌、代謝和心理的失衡，引起各系統(tǒng)改變的綜合癥候群。目前認(rèn)為卵巢功能衰退而引起雌激素分泌減少是引起絕經(jīng)期綜合征的主要原因，并且發(fā)現(xiàn)雌激素降低的水平與絕經(jīng)期綜合征的嚴(yán)重度基本呈正相關(guān)。

為了緩解女性更年期癥狀，雌激素替代療法即由外界供給維持身體需要的雌激素水平被廣為使用。但是臨床研究發(fā)現(xiàn)，有相當(dāng)一部分女性在使用雌激素后，卻導(dǎo)致了子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌等疾病。目前認(rèn)為這部分女性對(duì)雌激素極為敏感，服用雌激素會(huì)造成乳腺細(xì)胞和子宮內(nèi)壁上皮細(xì)胞快速分裂，癌細(xì)胞突變的機(jī)會(huì)增加，誘發(fā)了子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌等。

因此，建立簡(jiǎn)單、快速的女性雌激素敏感性毒副作用的檢測(cè)方法，能夠檢測(cè)出女性在雌激素代謝及解毒能力相關(guān)的基因單核苷酸位點(diǎn)基因型，及時(shí)篩查出對(duì)雌激素敏感的女性高危人群，從而調(diào)整雌激素替代療法用藥方案，這對(duì)于降低女性乳腺癌、子宮肌瘤發(fā)病率有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

基于ER-α基因Pvu?II(rs2234693)、XbaI(rs9340799)，CYP17基因MspA1?I(rs743572)的3個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型可用來(lái)評(píng)估女性雌激素生物學(xué)功能基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供一種女性雌激素敏感性毒副作用易感基因檢測(cè)試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測(cè)ER-α基因Pvu?II(rs2234693)、XbaI(rs9340799)，CYP17基因上MspA1I(rs743572)的3個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型的特異性引物對(duì)及DNA測(cè)序引物；

PCR反應(yīng)組件(包括Taq酶、dNTP混合液、反應(yīng)緩沖液、ddH2O等)；

PCR產(chǎn)物純化組件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA測(cè)序反應(yīng)組件(包括BigDye?mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應(yīng)體系：10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5ul；25mM?dNTP混合液0.2ul；5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對(duì)(每條引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR產(chǎn)物純化體系：1U/ul?SAP酶0.75ul；10U/ul?ExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。

測(cè)序反應(yīng)體系：25％BigDye?mix?1ul；3.2uM?DNA測(cè)序引物1ul；125mMEDTA溶液1ul；100％乙醇溶液15ul；70％乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O2ul。

本試劑盒供一人份檢測(cè)應(yīng)用，試劑盒的保存溫度為-20℃。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。

除非另行定義，文中所使用的所有專(zhuān)業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。

實(shí)施例1.檢測(cè)試劑盒的使用

1、抽提DNA模板

刮取受檢者口腔黏膜上皮細(xì)胞，用酚氯仿法抽提基因組DNA。

2、PCR擴(kuò)增反應(yīng)

使用檢測(cè)試劑盒中的PCR反應(yīng)組件，其中，含有下列引物對(duì)：

(1)ER-α(Pvu?II)/ER-α(XbaI)正向引物：5′TCTCCCACCTCAGCCTTACA3′

ER-α(Pvu?II)/ER-α(XbaI)反向引物：