[發明專利]5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗體的免疫原及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201110378381.3
• 申請日: 2011-11-24
• 公開（公告）號: CN102492671A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 王保民;譚桂玉;南鐵貴;趙洪偉;高巍;王敏;孫碩;曹振
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C07K16/40;G01N33/573
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.制備5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗體的免疫原的方法，包括如下步驟：

(1)將載體蛋白與雙功能試劑進行反應，得到反應產物I；所述雙功能試劑選自4-馬來酰亞胺基丁酸-N-琥珀酰亞胺酯、琥珀酰亞胺基4-[p-馬來酰亞胺苯基]丁酸鹽或N-[ε-馬來酰亞胺乙酰基氧]硫代琥珀酰亞胺酯；

(2)將所述步驟(1)得到的反應產物I與序列表中序列1所示的多肽進行反應，得到反應產物II，即得到5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗體的免疫原。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

所述步驟(1)中所述載體蛋白與所述雙功能試劑的投料摩爾比為1∶10-1∶20；

所述步驟(2)中所述反應產物I與所述多肽的投料摩爾比為1∶10-1∶20。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中所述反應的溫度為20℃-25℃，所述反應的時間為1h-3h。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中所述反應的溫度為20℃-25℃，所述反應的時間為10h-20h。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中所述載體蛋白為牛血清白蛋白或卵清白蛋白。

6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中在得到所述反應產物I之后，還包括以下步驟：

將所述反應產物I進行凝膠過濾層析，用0.01M?PH7.5磷酸鹽緩沖液進行洗脫，收集OD₂₇₈為1.5-3.0的洗脫液，即得到純化的反應產物I；所述凝膠過濾層析的介質為Sephadex?G-25。

7.根據權利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中還包括將所述反應產物II進行透析，得到純化的反應產物II的步驟。

8.根據權利要求1-7中任一所述的方法制備得到的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗體的免疫原。

9.由權利要求8所述的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗體的免疫原制備得到的抗體。

10.權利要求8所述的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶抗體的免疫原和/或權利要求9所述的抗體在鑒別轉5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因植物中的應用。