[發明專利]致瀉大腸桿菌四重熒光定量PCR檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201110376158.5
• 申請日: 2011-11-23
• 公開（公告）號: CN102399884A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 陳瑜;陳曉;鄭書發;孔海深
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10;C12Q1/06;G01N21/64
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種致瀉大腸桿菌四重熒光定量PCR檢測試劑盒，由熒光定量PCR反應液、O157標準品、H7標準品、O104標準品、H4標準品、對照品組成，其中熒光定量PCR反應液包含PCR反應緩沖液、特異性上下游引物和特異性探針，其中PCR反應緩沖液含氯化鎂和三磷酸脫氧核糖核苷酸混合物、耐熱Taq?DNA聚合酶，特異性上下游引物、特異性探針和標準品的序列分別如下：?

O157上游引物-F:?5’-?TGGCATGACGTTATAGGCTACAAT?-3’

O157下游引物-R:?5’-?AGCTTGTTCTAACTGGGCTAATCCT?-3’

O157特異性探針-P:?5’-?FAM-ATAGGATGACAAATATCTGCGCTGCT-BHQ1-3’

H7上游引物-F:?5’-GGCGCAGGCTGCTGATT?-3’

H7下游引物-R:?5’-AGCTTCAAAACGTGATGCGTTAGCTG?-3’

H7特異性探針-P:?5’-?HEX-CAGATTTACCCACATCAGCATG?-BHQ1-3’

O104上游引物-F:?5’-?AGGAGTAAACAATGTCAAAGCAAC?-3’???

O104下游引物-R:?5’-?AAAATCCTTTAAACTATACGCCC-3’?????

O104特異性探針-P?:?5’-?ROX-ACTTGGTTTTTTTGTATTAGCAATAAGTGGTG-BHQ2-3’

H4上游引物-F:?5’-?GCTGGGGGTAAACAAGTCAA?-3’???

H4下游引物-R:?5’-?CAGAATCAACGACCGCATATT?-3’?????

H4特異性探針-P?:?5’-?CY5-TGTCTTACACTGACACCGCGTCTAACA-BHQ3?-3’

O157基因標準品：

TGGCATGACG?TTATAGGCTA?CAATTATAGG?ATGACAAATA?TCTGCGCTGC?TATAGGATTA??GCCCAGTTAG??AACAAGCT

H7基因標準品：

GGCGCAGGCT?GCTGATTCAG?CTTCAAAACG?TGATGCGTTA?GCTGCCACCC?TTCATGCTGA??TGTGGGTAAA??TCTGTT

O104基因標準品：

TGTCGCGCAA??AGAATTTCAA?CTTTACTTGG??TTTTTTTGTA??TTAGCAATAA??GTGGTGTCAT??TTCAAGTCAG??GTTTCTAGGG??CGTATAGTTT?AAAGGATTTT

H4基因標準品：

GCTGGGGGTA?AACAAGTCAA?TTTACTGTCT?TACACTGACA?CCGCGTCTAA?CAGTACTAAA??TATGCGGTCG??TTGATTCTG。

2.根據權利要求1所述的一種致瀉大腸桿菌四重熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，對照品分陰性對照和陽性對照，陰性對照為高壓滅菌的焦碳酸二乙酯處理水，陽性對照為O157、H7、O104和H4的陽性質粒樣品。

3.根據權利要求1所述的一種致瀉大腸桿菌四重熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒保存于-20℃，盡量減少反復凍融。