[發明專利]一種大豆分離蛋白酶解產物中的天冬氨酸蛋白酶抑制劑的制備方法

無效

• 申請號: 201110375582.8
• 申請日: 2011-11-23
• 公開（公告）號: CN102367467A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: 田亞平;張國強
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/18
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種大豆分離蛋白酶解產物中的天冬氨酸蛋白酶抑制劑的制備方法，其特征為：采用木瓜蛋白酶酶解大豆分離蛋白，將酶解液進行熱處理，高速離心，上清液經DEAE-52離子交換層析得純化的天冬氨酸蛋白酶抑制劑，再經真空冷凍干燥得天冬氨酸蛋白酶抑制劑干粉；其工藝為：

A?篩選酶類優化酶解條件：

（1）大豆分離蛋白：市售；

（2）酶解：配置質量濃度5%的大豆分離蛋白溶液100?mL，分別用相同酶活單位的木瓜蛋白酶、風味蛋白酶、胰蛋白酶在各自最適溫度、pH條件下酶解相同的時間，研究酶解產物對胃蛋白酶的抑制活性，確定選用木瓜蛋白酶；

（3）木瓜蛋白酶酶解大豆分離蛋白：確定木瓜蛋白酶為酶解大豆分離蛋白的最適蛋白酶，酶解條件為：每克大豆分離蛋白加入的木瓜蛋白酶量為8000U，pH?6.5，55℃下水浴酶解60?min；

B大豆分離蛋白酶解后上清液的制備：

（4）高速離心：將酶解液以8000?r/min、4℃下離心30?min，取上清液；

（5）熱處理：將上清液進行70℃下水浴20?min，8000?r/min離心30?min，取上清；

C天冬氨酸蛋白酶抑制劑的分離制備：

（6）離子交換層析：DEAE-52離子交換色譜柱規格為30?cm×2.2?cm，平衡緩沖液為pH?6.8、10?mmol/L的磷酸鈉緩沖液；洗脫模式：以平衡緩沖液洗脫2?倍柱體積后，再以平衡緩沖液依次分別加含有不同濃度?0.2、0.4、0.6、0.8?mol/L?NaCl的磷酸緩沖液進行階段洗脫，流速為1.5?mL/min，進樣量為20?mL，280?nm波長紫外檢測；

（7）干燥成粉：采用真空冷凍干燥的方法將DEAE-52?離子交換層析中以含0.2?mol/L?NaCl的磷酸緩沖液梯度洗脫下收集的峰液進行冷凍干燥，即為天冬氨酸蛋白酶抑制劑干粉。