[發明專利]一種從發酵液中分離提取高純度布雷菲德菌素A的方法

有效

• 申請號: 201110370278.4
• 申請日: 2011-11-18
• 公開（公告）號: CN102399210A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 鄭裕國;王亞軍;吳燁飛;薛鋒;吳植獻;沈寅初
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C07D313/00
• 分類號: C07D313/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種從發酵液中分離提取高純度布雷菲德菌素A的方法，所述方法包括：

(1)將含有布雷菲德菌素A的發酵液，經固液分離去除固體雜質，得到澄清的布雷菲德菌素A發酵液上清液；

(2)以非極性大孔吸附樹脂為吸附劑，對步驟(1)所得布雷菲德菌素A溶液進行吸附層析操作，待樹脂吸附至飽和，水洗去除未吸附雜質，再以體積濃度30～60％的乙醇水溶液為洗脫劑洗脫，洗脫液減壓蒸餾回收溶劑、濃縮，獲得布雷菲德菌素A粗品；所述非極性大孔吸附樹脂為下列之一或其中兩種以上的混合物：HZ830、HZ820、HZ818、HZ816、HZ841、HZ801；

(3)將步驟(2)布雷菲德菌素A粗品復溶于乙醇中，得到布雷菲德菌素A飽和乙醇溶液，再以溶析結晶或冷卻結晶方式進行結晶操作，所得晶體在-4.0×10^-3～-4.0×10^-1MPa、4～40℃條件下真空干燥1～24小時，即得所述高純度布雷菲德菌素A。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述含有布雷菲德菌素A的發酵液由布雷正青霉變種CCTCC?No：M?208113發酵獲得。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于所述步驟(1)為：將含有布雷菲德菌素A的發酵液，常溫下9000r?min^-1離心10分鐘，收集上清液，即為所述澄清的布雷菲德菌素A發酵液上清液。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)為：步驟(1)所得布雷菲德菌素A發酵液上清液用非極性大孔吸附樹脂吸附至飽和，先用2～4B.V.的水淋洗除雜，再用3～8B.V.的體積濃度30～80％的乙醇或甲醇水溶液以0.05～0.20B.V./分鐘的流速洗脫，洗脫液在-4.0×10^-2～-8.0×10^-2MPa、40～60℃條件下減壓蒸餾回收溶劑，真空濃縮，得到布雷菲德菌素A粗品。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)為：步驟(2)所得布雷菲德菌素A粗品進一步于30～70℃下用適量乙醇溶解、配制布雷菲德菌素A飽和乙醇溶液，然后進行冷卻結晶操作：晶種投入量0.5～10.0mg/ml，控制降溫速度為0.05～5℃/min，攪拌速度10～400r/min，出晶溫度4～45℃，養晶時間0.5～72小時；抽濾，所得晶體在-4.0×10^-3～-4.0×10^-1MPa、4～40℃條件下真空干燥1～24小時，獲得高純度布雷菲德菌素A晶體。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)為：步驟(2)所得布雷菲德菌素A粗品常溫下用適量乙醇溶解、配制布雷菲德菌素A飽和乙醇溶液，進行溶析結晶操作：晶種投入量0.5～10.0mg/ml，在蠕動泵的控制下勻速將反溶劑水滴入至布雷菲德菌素A乙醇溶液，直至乙醇∶水體積比為1∶0.5～5，攪拌速度10～400r/min，所有反溶劑0.5～24小時滴完，養晶0.5～72小時；抽濾，所得晶體在-4.0×10^-3～-4.0×10^-1MPa、4～40℃條件下真空干燥1～24小時，得到高純度布雷菲德菌素A晶體。