[發(fā)明專利]一組卷煙賦香菌株及復(fù)配的微生物制劑及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110369808.3
• 申請(qǐng)日: 2011-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102399725A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-04-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂欣;趙德學(xué);王穎;胡喜懷;郭志剛;張曉妮;張崗;陳寶成;牟含軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué);陜西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/16;C12N1/02;A24B3/12;C12R1/07;C12R1/85
• 代理公司: 西安恒泰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61216
• 代理人: 李鄭建

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及3種卷煙賦香菌株及復(fù)配的卷煙賦香微生物制劑，其中包括2株芽孢桿菌(Bacillus?sp.)和1株酵母菌(Saccharomyces?sp.)，該卷煙賦香微生物制劑能夠用于卷煙發(fā)酵，替代傳統(tǒng)的加香，經(jīng)發(fā)酵處理的卷煙理化指標(biāo)和評(píng)吸結(jié)果均達(dá)到商品化卷煙標(biāo)準(zhǔn)。?

背景技術(shù)

卷煙工業(yè)中，根據(jù)不同卷煙葉組中的煙葉品種、煙葉產(chǎn)地、煙葉等級(jí)、煙葉年份和煙葉配比等，通過(guò)加料加香，賦予卷煙產(chǎn)品特定產(chǎn)品風(fēng)格，提供給消費(fèi)者特定的感官體驗(yàn)。通過(guò)加料，可以改善卷煙的吸食品質(zhì)、改善煙絲的物理性狀、改善煙絲的燃燒性和防止煙絲霉變等；通過(guò)加香，在不損害煙葉原有香氣的情況下，襯托煙香，同時(shí)掩蓋雜氣，達(dá)到增香賦香、改善吃味和協(xié)調(diào)香味的作用，進(jìn)而最終形成卷煙產(chǎn)品風(fēng)格。按照來(lái)源不同，煙草香料包括天然香料和合成香料2大類。然而，世界衛(wèi)生組織(WHO)在《煙草控制框架公約》中建議各國(guó)限制或禁止在煙草中使用香料等添加劑，包括葡萄糖、蜂蜜、香草醛和中草藥等天然或合成煙香香料都在范圍內(nèi)。我國(guó)已于2005年正式批準(zhǔn)《煙草控制框架公約》，減少和限制天然和合成香料的使用是大勢(shì)所趨。?

采用煙葉表面微生物來(lái)達(dá)到替代傳統(tǒng)加料加香的目的，以期形成新的卷煙的卷煙產(chǎn)品。本領(lǐng)域技術(shù)人員也做了大量的工作，實(shí)際上，微生物發(fā)酵已被證明可改善煙葉可用性，是煙葉吸食品質(zhì)形成的重要環(huán)節(jié)，根據(jù)發(fā)酵方式的不同，可分為人工發(fā)酵和自然發(fā)酵，國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)煙葉的人工發(fā)酵進(jìn)行了大量的研究和實(shí)踐。然而，但還未有僅使用復(fù)配微生物制劑用于卷煙產(chǎn)品風(fēng)格形成的報(bào)道。?

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)卷煙工業(yè)發(fā)展的需求，本發(fā)明目的在于，通過(guò)分離、篩選、培養(yǎng)得到了3株卷煙賦香菌株，經(jīng)復(fù)配可以用于卷煙葉組的賦香，替代傳統(tǒng)加料加香工藝。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，采用該復(fù)配菌株制劑用于卷煙發(fā)酵后，卷煙的理化指標(biāo)和評(píng)吸結(jié)果均達(dá)到商品化卷煙標(biāo)準(zhǔn)。?

為了實(shí)現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明的方法通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：?

一種卷煙賦香菌株，其特征在于，該卷煙賦香菌株命名為芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0007，保藏號(hào)為CGMCC?No.5332。?

一種卷煙賦香菌株，其特征在于，該卷煙賦香菌株命名為芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0013，保藏號(hào)為CGMCC?No.5333。?

一種卷煙賦香菌株，其特征在于，該卷煙賦香菌株命名為酵母菌(Saccharomyces?sp.)LBT1.0038，保藏號(hào)為CGMCC?No.5334。?

一種卷煙賦香微生物復(fù)配制劑，其特征在于，該卷煙賦香微生物復(fù)配制劑含有芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0007、芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0013和酵母菌(Saccharomyces?sp.)LBT1.0038，且芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0007∶芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0013∶酵母菌(Saccharomyces?sp.)LBT1.0038＝(0.001～1)∶(0.001～1.5)∶(0.005～15)。?

上述芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0007或芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0013的分離篩選方法，其特征在于，該方法先用無(wú)菌生理鹽水與1g醇化煙葉混合后，用無(wú)菌取樣的方法取1mL混合液加入到9mL滅菌生理鹽水中制成10^-1菌懸液，然后逐級(jí)稀釋，取10^-2、10^-3、10^-4、10?^-5、10^-6、10^-7六個(gè)稀釋度的菌懸液0.2mL涂布到LB培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24h，挑取長(zhǎng)勢(shì)良好，菌落飽滿均勻，且稀釋度適宜的平板的單菌落，鏡檢；?

LB培養(yǎng)基主要成分為：胰化蛋白胨：1％，酵母提取物：0.5％，NaCl：1％；酵母提取物(yeast?extract)，也稱酵母膏，市售。?

鏡檢若為純培養(yǎng)單一菌株，則接種于LB斜面固體培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24h后保藏于4℃冰箱；?

LB斜面固體培養(yǎng)基主要成分為：胰化蛋白胨：1％，酵母提取物：0.5％，NaCl：1％；瓊脂：2％；?

鏡檢若為混合菌株，則再次在LB培養(yǎng)基平板上進(jìn)行劃線分離，直至鏡檢為菌株純培養(yǎng)物后，接種斜面試管，37℃恒溫培養(yǎng)24h后保藏于4℃冰箱；?