[發明專利]一組卷煙賦香菌株及復配的微生物制劑及其應用

有效

• 申請號: 201110369808.3
• 申請日: 2011-11-19
• 公開（公告）號: CN102399725A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 呂欣;趙德學;王穎;胡喜懷;郭志剛;張曉妮;張崗;陳寶成;牟含軍
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學;陜西中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C12N1/02;A24B3/12;C12R1/07;C12R1/85
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李鄭建

1.一種卷煙賦香菌株，其特征在于，該卷煙賦香菌株命名為芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0007，保藏號為CGMCC?No.5332。

2.一種卷煙賦香菌株，其特征在于，該卷煙賦香菌株命名為芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0013保藏號為CGMCC?No.5333。

3.一種卷煙賦香菌株，其特征在于，該卷煙賦香菌株命名為酵母菌(Saccharomyces?sp.)LBT1.0038，保藏號為CGMCC?No.5334。

4.一種卷煙賦香微生物復配制劑，其特征在于，該卷煙賦香微生物復配制劑含有芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0007、芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0013和酵母菌(Saccharomyces?sp.)LBT1.0038，且芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0007∶芽孢桿菌(Bacillus?sp.)LBT1.0013∶酵母菌(Saccharomyces?sp.)LBT1.0038＝(0.001～1)∶(0.001～1.5)∶(0.005～15)。

5.權利要求1或2所述的卷煙賦香菌株的分離篩選方法，其特征在于，該方法，先用無菌生理鹽水與1g醇化煙葉混合后，用無菌取樣的方法取1mL混合液加入到9mL滅菌生理鹽水中制成10^-1菌懸液，然后逐級稀釋，取10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7六個稀釋度的菌懸液0.2mL涂布到LB培養基上，37℃恒溫培養24h，挑取長勢良好，菌落飽滿均勻，且稀釋度適宜的平板的單菌落，鏡檢；

LB培養基主要成分為：胰化蛋白胨：1％，酵母提取物：0.5％，NaCl：1％；

鏡檢若為純培養單一菌株，則接種于LB斜面固體培養基，37℃恒溫培養24h后保藏于4℃冰箱；

LB斜面固體培養基主要成分為：胰化蛋白胨：1％，酵母提取物：0.5％，NaCl：1％；瓊脂：2％；

鏡檢若為混合菌株，則再次在LB培養基平板上進行劃線分離，直至鏡檢為菌株純培養物后，接種斜面試管，37℃恒溫培養24h后保藏于4℃冰箱；

對篩選所得的所有純培養菌株用于煙葉發酵，并根據煙葉理化性質和評吸結果，最終篩選和確定卷煙賦香菌株。

6.權利要求3所述的卷煙賦香菌株的分離篩選方法，其特征在于，該方法，先用無菌生理鹽水與1g醇化煙葉混合后，用無菌取樣的方法取1mL混合液加入到9mL滅菌生理鹽水中制成10^-1菌懸液，然后逐級稀釋，取10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7六個稀釋度的菌懸液0.2mL涂布到YPD培養基上，32℃恒溫培養24h，挑取長勢良好，菌落飽滿均勻，且稀釋度適宜的平板的單菌落，鏡檢；

YPD培養基主要成分為：酵母膏：1％，蛋白胨：2％，葡萄糖：2％；

鏡檢若為純培養單一菌株，則接種于YPD斜面固體培養基，37℃恒溫培養24h后保藏于4℃冰箱；

YPD斜面固體培養基主要成分為：酵母膏：1％，蛋白胨：2％，葡萄糖：2％；瓊脂：2％；

鏡檢若為混合菌株，則再次在YPD培養基平板上進行劃線分離，直至鏡檢為菌株純培養物后，接種斜面試管，37℃恒溫培養24h后保藏于4℃冰箱；

對篩選所得的所有純培養菌株用于煙葉發酵，并根據煙葉理化性質和評吸結果，最終篩選和確定卷煙賦香菌株。