[發明專利]克林霉素的雜質分析制備方法

有效

• 申請號: 201110369629.X
• 申請日: 2011-11-18
• 公開（公告）號: CN103123342A
• 公開（公告）日: 2013-05-29
• 發明（設計）人: 李悅;孫秋實;吳彤
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08;C07H15/16
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳長會;謝燕軍

1.克林霉素原料的雜質分析制備方法，該方法用于對克林霉素原料進行分析，并從中分離制備所述雜質，包括下列步驟：

a)用LC-MS法測定所述克林霉素原料，根據被分析成分的相對保留時間和/或分子量確定所述原料中的一種或多種雜質；

b)根據步驟a)中所述的一種或多種雜質的相對保留時間和/或分子量確定柱層析法的條件，使用正相硅膠柱層析法富集該相對保留時間和/或分子量對應的一種或多種雜質；

c)根據步驟a)中所述的一種或多種雜質的相對保留時間所顯示的色譜保留行為確定制備色譜法的條件，用制備色譜法收集所述保留時間相對應的一種或多種雜質。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a)中，所述的LC-MS法測定所采用HPLC條件為：

流動相18％乙腈、3％四氫呋喃、79％水和0.2％甲酸；

pH氨水調至5.43-5.47；

柱溫25℃；

流速1.0ml/min；

檢測波長210nm；

色譜柱Diamonsil?ODS?C18，5μm，250×4.6mm柱。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟b)中，所述的正相硅膠柱層析法富集采用的固定相為100～200目硅膠，流動相為乙酸乙酯和水飽和甲醇混合溶劑。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟b)包括：

b?1)樣品∶硅膠＝1∶50，將樣品溶于甲醇中，干法上柱；

b2)使用乙酸乙酯∶甲醇混合溶劑梯度洗脫，洗脫順序如下：(乙酸乙酯∶甲醇9∶1)1800mL，(乙酸乙酯∶甲醇6∶1)1680mL，(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)600mL，(乙酸乙酯∶甲醇4∶1)600mL，(乙酸乙酯∶甲醇3∶1)600mL，(乙酸乙酯∶甲醇2∶1)600mL，(乙酸乙酯∶甲醇1∶1)600mL，甲醇600mL；

b3)合并收集(乙酸乙酯∶甲醇9∶1)、(乙酸乙酯∶甲醇6∶1)和(乙酸乙酯∶甲醇5∶1)-甲醇的洗脫液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)中，所述的制備色譜法采用二次制備，其中一次制備所采用條件包括：

流動相為20％乙腈，1.25％四氫呋喃，78.75％水，0.2％甲酸；

氨水調pH為5.58左右；

色譜柱μBondapak^TM?C18，7.8×300mm，檢測波長為210nm，流速為1.0×2.25mL/min；

收集保留時間為29.525min處的峰相對應的被分析物；

對所得被分析物進行采用二元泵的二次制備，流動相的條件為：A泵：21％乙腈，3％四氫呋喃，76％水，0.2％甲酸，pH為5.20左右；B泵：乙腈；A∶B＝95∶5；色譜柱Sepax?HP-C18，5μm?10.0×250mm，檢測波長：210nm，流速：1.5mL/min，柱溫：35℃；收集保留時間為25.90min和27.68min處的峰相對應的被分析物。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)中，所述的制備色譜法所采用條件包括：

流動相：18％乙腈，4.5％四氫呋喃，77.5％水，0.2％甲酸；

氨水調pH值為5.45左右；

色譜柱：Agilent?ZORBAX?SB-C18(5μm，9.4×250mm)；檢測波長：210nm；流速：1.0×2.25mL/min；

收集保留時間為41.080處的峰相對應的被分析物。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，對所得被分析物進行純化，條件如下：儀器：HP?1100，配有Waters?2695?Separation?Module，Waters?2487?DualλAbsorbance?Detector?Waters；檢測波長：210nm；流速：1.5mL/min；柱溫：35℃；流動相：25％乙腈，3％四氫呋喃，72％水，0.2％甲酸，氨水調pH為5.19左右。

8.根據權利要求1-5中任一項所述方法制備的雜質標準品，其特征在于，所述雜質具有如下結構式I：

9.根據權利要求1-5中任一項所述方法制備的雜質標準品，其特征在于，所述雜質具有如下結構式II：