[發明專利]全人源的抗人表皮生長因子受體的單鏈抗體及其應用

有效

• 申請號: 201110369620.9
• 申請日: 2011-11-21
• 公開（公告）號: CN102504026A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 王旻;周雅瓊;張娟
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/63;C12N1/21;A61K39/395;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物工程領域，具體涉及一種新的可與人表皮生長因子受體特異結合的高親和力全人源單鏈抗體，能抑制表皮生長因子受體的活化，從而抑制高表達表皮生長因子受體腫瘤細胞A431的生長，是一種具有抗腫瘤活性的基因工程抗體。

背景技術

正常細胞的增殖是通過各自的配體嚴格激活其生長因子受體來控制的，比如生長因子受體酪氨酸激酶。癌細胞也是在生長因子受體的激活下增殖的，但失去了正常增殖的嚴格控制。這種失控可能是由很多因素引起，比如生長因子的過度表達或生長因子受體的過度表達，以及由生長因子調控的生化途徑的自發性激活。參與致癌的受體包括表皮生長因子受體，來源于血小板的生長因子受體，類胰島素生長因子受體，神經生長因子受體和成纖維生長因子受體等。

人表皮生長因子受體(epidermal?growth?factor?receptor，也稱為HER-1或Erb-B1，本文稱作“EGFR”)是170kDa的跨膜糖蛋白，是表皮生長因子受體家族中的四成員之一，其由c-erbB原癌基因編碼，由胞外區、跨膜區及胞內區3部分組成。胞內區顯示固有的酪氨酸激酶活性，跨膜區由一個親脂性多肽螺旋構成；胞外區分成4個亞區，是EGFR與配體(生長因子等)結合的部位。在非活性狀態下EGFR受體與其配體結合后可形成同源或異源二聚體，受體胞內區發生磷酸化可以啟動一系列胞內信號級聯。EGFR結合包括以下各項的配體：表皮生長因子(EGF)，轉化生長因子-α(TGF-α)，雙調蛋白，肝素結合EGF(hb-EGF)，β動物纖維素和epiregulin。EGFR及其配體是細胞信號傳導系統的一部分，EGFR經由酪氨酸激酶介導的信號轉導途徑調節許多細胞過程，包括但不限于激活控制細胞增殖、分化、細胞存活、程序性細胞死亡、血管發生、有絲分裂發生和轉移的信號轉導途徑。研究表明，EGFR基因拷貝數增加或者過度表達，均能促進正常細胞的轉化和惡性腫瘤的轉移，EGFR的信號傳導網絡在腫瘤的形成和發展過程中占了重要的地位。已經發現它的表達在許多人類腫瘤，包括頭和頸、乳腺、結腸、前列腺、肺和卵巢的癌中上調，過量表達的程度與不佳的臨床預后相關。EGFR高表達的腫瘤預后差，容易轉移、生存時間短。EGFR由于涉及到腫瘤形成，已經成為抗腫瘤治療的特異性靶目標。

靶向EGFR藥物主要由兩類：一類是直接作用于受體細胞內區段以防止信號傳導的合成的酪氨酸激酶抑制劑(TKI)，主要包括吉非替尼、erlotinib等等；另一類是阻斷配體結合到受體胞外功能域的單克隆抗體(MAb)，包括西妥昔單抗(cetuximab)等。

西妥昔單抗(Cetuximab，商品名Erbitux)是抗人EGFR的嵌合型IgG1單克隆抗體，它于2006年被美國食品藥品管理局批準與依立替康聯合或單獨用藥以治療表達表皮生長因子受體的、對依立替康的化療無效或耐受的轉移結腸直腸癌患者。但Cetuximab是一個嵌合型抗體，仍未能達到人源化。因此，靶向EGFR胞外區的全人源抗體能降低免疫原性，另外分子量只有全長抗體的1/6的抗EGFR單鏈抗體可以通過E.coli發酵降低生產成本。

發明內容

發明目的

本發明提供一種具有潛在醫學和藥學價值的全人源抗人EGFR的單鏈抗體。本發明單鏈抗體的特征為特異性結合人EGFR胞外區，在體外能夠抑制表皮癌細胞A431的生長。

技術方案

一種全人源的抗人表皮生長因子受體的單鏈抗體，其特征在于：

抗人表皮生長因子受體的單鏈抗體包括重鏈可變區域和輕鏈可變區域，并且重鏈可變域和輕鏈可變區域通過柔性肽連接，重鏈可變區域的氨基酸序列為SEQ?ID?NO：1；輕鏈可變區域為SEQ?ID?NO：2的氨基酸序列，柔性肽的氨基酸序列為SSGGGGSGGGGSGGSA，SEQ?IDNO：9。

所述的抗人表皮生長因子受體的單鏈抗體，具有重鏈CDR3域，該域包含SEQ?ID?NO：5的氨基酸序列，或通過氨基酸置換或者修飾得到的氨基酸序列；所述的抗人表皮生長因子受體的單鏈抗體，具有輕鏈CDR3域，該域包含SEQ?ID?NO：8的氨基酸序列，或通過氨基酸置換或者修飾得到的氨基酸序列。

所述的抗人表皮生長因子受體的單鏈抗體具有重鏈CDR2域，該域包含SEQ?ID?NO：4的氨基酸序列，或通過氨基酸置換或者修飾得到的氨基酸序列；所述的抗人表皮生長因子受體的單鏈抗體具有輕鏈CDR2域，該域包含SEQ?ID?NO：7的氨基酸序列，或通過氨基酸置換或者修飾得到的氨基酸序列。