[發明專利]一種利用PCR-RFLP技術鑒別西花薊馬品系的方法無效
| 申請號： | 201110366091.7 | 申請日： | 2011-11-17 |
| 公開（公告）號： | CN102392075A | 公開（公告）日： | 2012-03-28 |
| 發明（設計）人： | 于毅;褚棟;段惠生;張安盛;國棟 | 申請（專利權）人： | 山東省農業科學院植物保護研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219 | 代理人： | 趙龍群 |
| 地址： | 250100 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 pcr rflp 技術 鑒別 西花薊馬 品系 方法 | ||
1.一種利用PCR-RFLP技術鑒別西花薊馬品系的方法，其特征在于，步驟如下：
(1)提取西花薊馬基因組DNA；
(2)以西花薊馬基因組DNA為模板對其線粒體COI基因進行PCR擴增；
PCR體系中，引物序列如下：
正義引物：5’GGATCACCTGATATAGCATTCCC3’；SEQ?ID?NO.1
反義引物：5’ACTGTAAATATATGATGAGCTCA3’；SEQ?ID?NO.2
(3)對步驟(2)制得的PCR產物用限制性內切酶EarI酶切，得酶切產物；
(4)對步驟(3)制得的酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，當PCR產物電泳圖譜顯示被測樣品有兩條不同長度的條帶時，則該被檢測樣品為L型西花薊馬；當PCR產物電泳圖譜顯示被測樣品有一條條帶時，則為G型西花薊馬。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增體系為：
基因組DNA??2μl，20μM引物0.4μl，5U/μl?Taq酶0.2μl，10×Taq?Buffer?5μl，
10mM?dNTP??0.4μl，ddH2O補至20μl。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增條件如下：94℃，5min；進行35個循環的94℃50sec，53℃40sec，72℃50sec；72℃延伸7min；4℃，保溫。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中EarI酶切反應條件如下：37℃，2hr。
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