[發明專利]一種疏血通制劑的質量檢測方法

有效

• 申請號: 201110366052.7
• 申請日: 2011-11-17
• 公開（公告）號: CN102507792A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 李振國
• 申請（專利權）人: 牡丹江友搏藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種疏血通制劑的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括含量測定及指紋圖譜鑒定，其中，含量測定包括氨基酸含量測定和糖含量測定；指紋圖譜鑒定包括氨基酸指紋圖譜鑒定、糖指紋圖譜鑒定和小分子物質指紋圖譜鑒定；

所述疏血通制劑用如下方法制得：將水蛭和地龍分別用2～4倍體積的生理鹽水浸提15～30小時，過濾，以體積百分數計，將33％～84％水蛭生理鹽水提取液與16％～67％地龍生理鹽水提取液的比例混合。

2.根據權利要求1所述的質量檢測方法，其特征在于，所述氨基酸含量測定包括如下步驟：

1)對照品溶液的制備

分別精密稱取10mg或15mg氨基酸標準品，用0.1N鹽酸定容至5ml，制得17種氨基酸儲備液；所述氨基酸標準品選自天門冬氨酸標準品、甘氨酸標準品、蘇氨酸標準品、丙氨酸標準品、酪氨酸標準品、胱氨酸標準品、苯丙氨酸標準品、異亮氨酸標準品、亮氨酸標準品、脯氨酸標準品、谷氨酸標準品、絲氨酸標準品、組氨酸標準品、精氨酸標準品、纈氨酸標準品、蛋氨酸標準品和賴氨酸標準品；

然后分別精密吸取0.5mL、1mL或2mL上述17種氨基酸儲備液，混合后用0.1N鹽酸定容至25mL，制得1號混合對照品溶液；

2)標準曲線的制備

精密量取2mL、3mL、4mL上述1號混合對照品溶液，分別用0.1N鹽酸定容至5mL，得2號、3號、4號混合對照品溶液；取2mL?3號混合對照品溶液，用0.1N鹽酸定容至5mL，得5號混合對照品溶液；取2mL4號混合對照品溶液，用0.1N鹽酸定容至5mL，得6號混合對照品溶液；取1mL?3號混合對照品溶液，用0.1N鹽酸定容至10mL刻度，得7號混合對照品溶液；

分別將上述1-7號混合對照品溶液注入液相色譜儀測定峰面積，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線；其中，色譜條件與系統適用性試驗為：

色譜柱：4.6×150mm，3.5μm?Zorbax?Eclipse-AAA柱；流速：2mL/min，流動相組成：A相pH7.8的40mmol/L?Na₂HPO₄溶液、B相乙腈∶甲醇∶水＝40～50∶40～50∶10，以A相與B相的體積比為0～100∶100～0進行梯度洗脫；檢測波長：338nm、262nm；柱溫為40℃；進樣量：1μL；理論板數按丙氨酸峰計算應不低于10000；

3)游離氨基酸含量測定

取1mL待測樣品，用0.1N鹽酸定容至5mL，制得未水解樣品；按照步驟2)的色譜條件測定峰面積，從標準曲線上讀出供試品溶液中氨基酸的含量，計算得出；

4)總氨基酸含量測定

精密量取0.5mL待測樣品，加入2mL含1％苯酚的6N鹽酸，沖氬氣10秒后，密封于110℃水解22h后，冷卻至室溫；然后加入1mL?40％NaOH溶液，混勻，用0.1N鹽酸定容至5mL，制得水解樣品；按照步驟2)的色譜條件測定峰面積，從標準曲線上讀出供試品溶液中氨基酸的含量，計算得出。

3.根據權利要求2所述的質量檢測方法，其特征在于，色譜條件中所述梯度洗脫的洗脫程序為：0～1.9min：A：100％、B：0％；1.9～18.1min：A：100％-43％、B：0％-57％；18.1～18.6min：A：43％～0％、B：57％～100％；18.6～22.3min：A：0％、B：100％；22.3～23.2min：A：0％～100％、B：100％～0％；23.2～26min：A：100％，B：0％。