[發明專利]制備轉TGEV-S基因玉米的方法

無效

• 申請號: 201110365335.X
• 申請日: 2011-11-17
• 公開（公告）號: CN103114105A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 王金洛;張曉東;楊兵;曾作財;許承楊
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A61K36/899;A61P31/14;A61K127/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種在植物中表達TGEV?S蛋白的方法，包括如下步驟：將TGEV?S蛋白的編碼基因導入出發植物，得到表達所述TGEV?S蛋白的轉基因植物。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述出發植物為玉米。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述編碼基因為如下1)或2)或3)或4)所示：

1)其核苷酸序列是SEQ?ID?NO：2中自5′末端第1-2208位核苷酸所示DNA分子；

2)其核苷酸序列是SEQ?ID?NO：2所示DNA分子；

3)在嚴格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；

4)與1)或2)限定的DNA序列具有90％以上的同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述編碼基因是通過權利要求5所述的重組表達載體導入的。

5.一種重組表達載體，按照如下方法制備：

用SacI和EcoRI雙酶切載體pBI221，回收農桿菌胭脂堿合成酶基因NOS3′末端終止子片段，再將其插入載體pSP72的SacI和EcoRI位點間，得到重組載體，計作pBPC18；

將E35S啟動子插入pBPC18的HindIII和XbaI位點，得到中間重組載體1；將Hsp70?intron1用BglII和BamHI酶切后插入所述中間重組載體1的BamHI位點，得到重組載體，計作pBAC154；

將所述TGEV?S蛋白的編碼基因插入載體pBAC154的BamHI和SacI位點，得到重組載體，計作pBAC175；

用HindIII和BamHI酶切質粒pBARGUS，回收含有CaMV?35S啟動子和玉米Adh1內含子的目的片段，再將其插入到pSP72的HindIII和BamHI位點，得到中間重組載體2；將編碼抗除草劑草甘膦的玉米EPSP基因插入中間重組載體2的BamHI和EcoRI位點，獲得重組載體，計作pSHK49；

將pSHK49用EcoRI酶切后補成平端，引入含HindIII位點的適配子序列，計作pSHK49H3；

用HindIII酶切pSHK49H3，回收含有CaMV?35S啟動子和玉米Adh1內含子和EPSP基因的片段，將其插入到pBAC175的HindIIII位點，得到目的重組表達載體。

6.一種預防豬傳染性胃腸炎的產品，其活性成分為權利要求1-4中任一所述方法制備得到的轉基因植物的組織或器官。

7.根據權利要求6所述的產品，其特征在于：所述組織或器官為葉片。

8.權利要求1-4中任一所述方法制備得到的轉基因植物的組織或器官在制備預防豬傳染性胃腸炎的產品中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：所述組織或器官為葉片。