[發(fā)明專利]一種高通量快速提取真菌基因組DNA的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110365304.4
• 申請日: 2011-11-17
• 公開（公告）號: CN102392016A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發(fā)明（設計）人: 鄒克琴;胡東維;李素芳;王為民
• 申請（專利權）人: 中國計量學院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種高通量快速提取真菌基因組DNA的方法，所述方法按如下步驟：

(1)菌絲體的裂解：從培養(yǎng)基上挑取真菌菌塊樣品，投入CTAB緩沖液中，用消毒過的研磨棒充分研磨菌塊；所述CTAB緩沖液組成如下：CTAB?1～5％，NaCl?1～2mol/L，TrisCl?50～100mmol/L，EDTA10～50mmol/L，SDS?0.5～2％，PVP?0.2～1％，溶劑為去離子水；

(2)RNA雜質的去除：將研磨好的樣品補加CTAB緩沖液和RNase?A，置于60～70℃水浴中，每隔5～10mins輕輕搖動，20～30mins后取出；

(3)蛋白質雜質的去除：加入氯仿∶異戊醇體積比為24∶1的CIA液，振蕩混勻1～2mins；

(4)DNA的沉淀：移取上層水相于1.5mL離心管中，加入預冷的異丙醇溶液，上下顛倒幾次使樣品混勻，置于-20℃下20～30mins，使核酸充分沉淀；

(5)DNA的溶解：離心，棄上清液，將DNA沉淀吸干水分，即得樣品基因組DNA，用TE緩沖液溶解，所述TE緩沖液組成如下：-20℃保存DNA樣品備用。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述TE緩沖液組成如下：1mol/LTrisCl，0.5mol/L?EDTA，pH8.0，溶劑為去離子水。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)取1.5mL離心管，加入CTAB緩沖液100μL，從培養(yǎng)基上挑取真菌菌塊樣品，投入離心管中，用75％酒精消毒過的研磨棒充分研磨菌塊；所述CTAB緩沖液組成如下：CTAB?1.5％，NaCl?1.4mol/L，TrisCl100mmol/L，EDTA20mmol/L，SDS?1％，PVP?1％，溶劑為去離子水；

(2)研磨好的樣品補加400μL?CTAB緩沖液和3～5μl?RNase?A，置于65℃水浴中，每隔10mins輕輕搖動，30min后取出；

(3)加入氯仿∶異戊醇體積比為24∶1的CIA液700μL，振蕩混勻1min；

(4)移取上層水相于離心管中，加入700μL預冷的異丙醇，顛倒幾次使樣品混勻，置于-20℃下20mins，使核酸充分沉淀；

(5)離心，棄上清，取沉淀吸干水分，即得樣品基因組DNA，用TE緩沖液溶解DNA，-20℃保存DNA樣品備用。

4.如權利要求1～3之一所述的方法，其特征在于所述真菌為下列之一：水稻稻曲菌、畢赤氏酵母菌、黑霉菌、平菇、黑木耳。