[發(fā)明專(zhuān)利]量子點(diǎn)標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物的溶出伏安測(cè)定法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110364751.8
• 申請(qǐng)日: 2011-11-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102507678A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐春祥;楊池;王明亮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/26
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 南京蘇高專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說(shuō)，本發(fā)明描述了一種用于藥效-藥動(dòng)模型研究的生物傳感器的制備以及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

藥代動(dòng)力學(xué)/藥效動(dòng)力學(xué)模型（PK/PD）是藥物研究中一個(gè)重要的手段，它通過(guò)監(jiān)測(cè)的給藥后血藥濃度量和相應(yīng)疾病標(biāo)示物，通過(guò)PK/PD模型來(lái)預(yù)測(cè)和評(píng)價(jià)給藥的劑量是否合適，以及制定合適的給藥劑量等。傳統(tǒng)的監(jiān)測(cè)血藥濃度和疾病標(biāo)示物，通常是通過(guò)高效液相色譜和免疫等分析方法分別監(jiān)測(cè)血藥濃度和生物標(biāo)示物。這樣不僅存在監(jiān)測(cè)設(shè)備的昂貴、耗時(shí)以及需要專(zhuān)業(yè)人員操作問(wèn)題，不能同時(shí)監(jiān)測(cè)也就不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)血藥濃度和生物標(biāo)示物的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問(wèn)題：本發(fā)明針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，提供一種量子點(diǎn)標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物的溶出伏安測(cè)定法，該方法利用多量子點(diǎn)標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物，對(duì)相應(yīng)生物藥物和生物標(biāo)示物進(jìn)行檢測(cè)，具有靈敏度高、穩(wěn)定性好。

技術(shù)方案：在本發(fā)明中，量子點(diǎn)標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物的溶出伏安測(cè)定法利用兩種不同量子點(diǎn)分別標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物，并同時(shí)在芯片上固定化兩種凝集素，使標(biāo)記了量子點(diǎn)的生物藥物和生物標(biāo)示物分別和芯片上的凝集素進(jìn)行特異性結(jié)合，把標(biāo)記在生物藥物和生物標(biāo)示物上的量子點(diǎn)連接到芯片上；然后用芯片去檢測(cè)待測(cè)的生物藥物和生物標(biāo)示物；標(biāo)記的生物藥物和生物標(biāo)示物和待測(cè)的生物藥物和生物標(biāo)示物與凝集素結(jié)合能力的不同，不同濃度的待測(cè)生物藥物和生物標(biāo)示物會(huì)取代芯片上標(biāo)記的生物藥物和生物標(biāo)示物，用溶出伏安法測(cè)定溶出的芯片上留下的金屬離子的濃度，建立金屬離子濃度與生物藥物和生物標(biāo)示物濃度之間的關(guān)系，從而確定待測(cè)生物藥物和生物標(biāo)示物濃度。

具體測(cè)定方法為：

1.）將0.5~5毫克ZnO量子點(diǎn)分散到500~600納克/毫升的癌胚抗原CEA溶液中，在室溫下震蕩10min，離心，用pH值為6.8~7.5的磷酸鹽緩沖溶液清洗三次；再加500?μL?1%??w/v牛血清蛋白，15~37^oC下震蕩10~30min，離心，用pH值為6.8~7.5的磷酸鹽緩沖溶液清洗三次；最終分散于50~150?μLpH值為6.8~7.5的磷酸鹽緩沖溶液；

同樣的，將0.5~5毫克CdSe量子點(diǎn)分散到500~600微克/毫升的西妥昔單抗C225,其余步驟同上，最終分散于50~150?μLpH值為6.8~7.5的磷酸鹽緩沖溶液，不用時(shí)保存于冰箱保溫層；

2.）將二氧化硅片或玻璃片分別在丙酮、乙醇和水中分別超聲5min，然后在60~80?°C?的NH₄OH/H₂O_2?/H₂O??1:1:5~7,v/v和HCl/H₂O₂/H₂O???1:1:4~6,v/v分別浸泡5~10min。拿出后用清水洗干凈，晾干；然后放入3~5%??v/v的3-胺丙基乙氧基硅烷的乙醇溶液中浸泡?2~5?h，洗干凈、晾干，再放入含有1~2%??v/v戊二醛pH值為6.8~7.5的磷酸鹽緩沖溶液，于?4^oC靜置8~12?h，隨后用去離子水清洗、晾干，待用；

3.）將修飾后的芯片安裝在一個(gè)孔徑小于芯片邊長(zhǎng)的電解池中，將50?μL含?1~2mg/mL凝集素pH值為6.8~7.5的磷酸鹽緩沖溶液滴在上述處理好的芯片上,?并于?4^oC靜置8~12?h,?隨后用去離子水清洗。然后將上述芯片用含0.5~1%?w/v牛血清蛋白?和0.05?~0.1%??v/v吐溫-20?浸泡?0.5~1?h,?隨后用去離子水清洗、待用；

4.）取1步中?50~100?uL滴在3步制備好的芯片上，放置15~50min,用去離子水清洗芯片表面3次；

5.）檢測(cè)方法，將待測(cè)樣品滴在4步中的芯片上，放置15~50min,用去離子水清洗芯片表面3次；

6.）向電解池中注入pH值為1~3的鹽酸溶液溶解第5步芯片上的留下的氧化鋅或硒化鎘量子點(diǎn)，并用pH值為1~3鹽酸溶液洗三次，合并溶解液和洗液，加pH值為6.8~7.5的磷酸鹽緩沖溶液至1~3毫升；

7.）用鉑電極為對(duì)電極，銀/氯化銀電極為參比電極，汞膜電極為工作電極，-?0.4~-?1.3伏富集90~150秒，用方波伏安法測(cè)金屬離子的溶出峰，鋅和鎘的電位約分別在-1.1伏和-0.7伏；