[發(fā)明專利]量子點(diǎn)標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物的溶出伏安測(cè)定法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110364751.8
• 申請(qǐng)日: 2011-11-17
• 公開（公告）號(hào): CN102507678A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐春祥;楊池;王明亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種量子點(diǎn)標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物的溶出伏安測(cè)定法，其特征在于

利用兩種不同量子點(diǎn)分別標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物，并同時(shí)在芯片上固定化兩種凝集素，使標(biāo)記了量子點(diǎn)的生物藥物和生物標(biāo)示物分別和芯片上的凝集素進(jìn)行特異性結(jié)合，把標(biāo)記在生物藥物和生物標(biāo)示物上的量子點(diǎn)連接到芯片上；然后用芯片去檢測(cè)待測(cè)的生物藥物和生物標(biāo)示物；標(biāo)記的生物藥物和生物標(biāo)示物和待測(cè)的生物藥物和生物標(biāo)示物與凝集素結(jié)合能力的不同，不同濃度的待測(cè)生物藥物和生物標(biāo)示物會(huì)取代芯片上標(biāo)記的生物藥物和生物標(biāo)示物，用溶出伏安法測(cè)定溶出的芯片上留下的金屬離子的濃度，建立金屬離子濃度與生物藥物和生物標(biāo)示物濃度之間的關(guān)系，從而確定待測(cè)生物藥物和生物標(biāo)示物濃度。

2.如權(quán)利要求2所述的量子點(diǎn)標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物的溶出伏安測(cè)定法，其特征在于具體測(cè)定方法為：

1.)將0.5～5毫克ZnO量子點(diǎn)分散到500～600納克/毫升的癌胚抗原CEA溶液中，在室溫下震蕩10min，離心，用pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液清洗三次；再加500μL?1％w/v牛血清蛋白，15～37℃下震蕩10～30min，離心，用pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液清洗三次；最終分散于50～150μLpH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液；

同樣的，將0.5～5毫克CdSe量子點(diǎn)分散到500～600微克/毫升的西妥昔單抗C225，其余步驟同上，最終分散于50～150μLpH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液，不用時(shí)保存于冰箱保溫層；

2.)將二氧化硅片或玻璃片分別在丙酮、乙醇和水中分別超聲5min，然后在60～80℃的NH₄OH/H₂O₂/H₂O?1∶1∶5～7，v/v和HCl/H₂O₂/H₂O?1∶1∶4～6，v/v分別浸泡5～10min。拿出后用清水洗干凈，晾干；然后放入3～5％?v/v的3-胺丙基乙氧基硅烷的乙醇溶液中浸泡2～5h，洗干凈、晾干，再放入含有1～2％?v/v戊二醛pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液，于4℃靜置8～12h，隨后用去離子水清洗、晾干，待用；

3.)將修飾后的芯片安裝在一個(gè)孔徑小于芯片邊長(zhǎng)的電解池中，將50μL含1～2mg/mL凝集素pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液滴在上述處理好的芯片上，并于4℃靜置8～12h，隨后用去離子水清洗。然后將上述芯片用含0.5～1％w/v牛血清蛋白和0.05～0.1％?v/v吐溫-20浸泡0.5～1h，隨后用去離子水清洗、待用；

4.)取1步中50～100uL滴在3步制備好的芯片上，放置15～50min，用去離子水清洗芯片表面3次；

5.)檢測(cè)方法，將待測(cè)樣品滴在4步中的芯片上，放置15～50min，用去離子水清洗芯片表面3次；

6.)向電解池中注入pH值為1～3的鹽酸溶液溶解第5步芯片上的留下的氧化鋅或硒化鎘量子點(diǎn)，并用pH值為1～3鹽酸溶液洗三次，合并溶解液和洗液，加pH值為6.8～7.5的磷酸鹽緩沖溶液至1～3毫升；

7.)用鉑電極為對(duì)電極，銀/氯化銀電極為參比電極，汞膜電極為工作電極，-0.4～-1.3伏富集90～150秒，用方波伏安法測(cè)金屬離子的溶出峰，鋅和鎘的電位約分別在-1.1伏和-0.7伏；

8.)改變第5步生物藥物和生物標(biāo)示物濃度，重復(fù)第7步，測(cè)定一系列生物藥物和生物標(biāo)示物濃度相對(duì)應(yīng)的金屬離子的溶出伏安峰的峰值電流，建立峰值電流與生物藥物和生物標(biāo)示物濃度之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的量子點(diǎn)標(biāo)記生物藥物和生物標(biāo)示物的溶出伏安測(cè)定法，其特征在于所述芯片為二氧化硅片或玻璃片。