[發(fā)明專利]一種F蛋白檢測(cè)試劑及檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110364274.5
• 申請(qǐng)日: 2011-11-16
• 公開（公告）號(hào): CN102721814A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉樹業(yè);任峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津美德太平洋科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 董一寧

1.一種F蛋白檢測(cè)試劑，其特征在于：包括F蛋白的兔抗人多克隆抗體、酶標(biāo)抗體、顯色試劑和終止液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的F蛋白檢測(cè)試劑，其特征在于：所述酶標(biāo)抗體為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的F蛋白檢測(cè)試劑，其特征在于：所述顯色試劑為含0.01％H₂O₂的水溶液和pH?7.4含0.4mg/ml?TMB的0.1mol/L枸椽酸緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的F蛋白檢測(cè)試劑，其特征在于：所述終止液為2M的硫酸水溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的F蛋白檢測(cè)試劑，其特征在于：還包括緩沖液和洗滌液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的F蛋白檢測(cè)試劑，其特征在于：所述包括緩沖液為PBS?0.01M，pH?7.4；所述洗滌液為PBST，配置方法為：10×TBSpH?7.6：Tris-堿，60.57g；1M?HCl，420ml；NaCl，85-90g，用HCl調(diào)pH至7.6后，定容于1L；1×TBST：將10×TBS稀釋10倍，加入0.1％(v/v)的TWEEN-20。

7.利用權(quán)利要求1-6之一所述的F蛋白檢測(cè)試劑檢測(cè)F蛋白含量的方法，其特征在于：步驟如下：

(1)包被：使用純化的F蛋白多克隆抗體按10μg/ml蛋白量進(jìn)行包被，100μl/孔，4℃過(guò)夜，0.01M?PBS?pH?7.4洗滌三次，含1％胎牛血清的PBS封閉，110μl/孔，37℃1小時(shí)，棄包被液待用；

(2)取包被有F蛋白多克隆抗體的96孔板，加入待測(cè)血清50μl/孔，然后酶標(biāo)抗體50μl/孔，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃恒溫箱溫育60min；

(3)棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿PBST，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板3-8次；

(4)每孔加入TMB底物0.01％H₂O₂的水溶液和pH?7.4含0.4mg/ml?TMB的0.1mol/L枸椽酸緩沖液各50μl，37℃避光孵育15min；

(5)每孔加入終止液50μl，于15min內(nèi)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

8.一種如權(quán)利要求1所述的F蛋白檢測(cè)試劑用于酶免儀檢測(cè)F蛋白的用途。

9.一種用于免疫比濁法專用F蛋白檢測(cè)試劑盒，其特征在于：試劑組成如下：

試劑R1：含小鼠抗人F蛋白單克隆抗體的抗血清，

試劑R2：增濁劑，防腐劑，表面活性劑，Tris緩沖液；

定值血清R3：含定量純化的基因工程重組F蛋白；

所述試劑R1為小鼠抗人F蛋白單克隆抗體，抗血清濃度為10μg/ml；

所述試劑R2中的增濁劑采用4％g/ml的聚乙二醇-6000，

所述防腐劑為山梨酸鉀；

所述表面活性劑為1％SDS?v/v，Tris緩沖液pH＝8.2，濃度為20mmol/L。

所述試劑R3為F蛋白凍干品，每份定值F蛋白含量為1000μg，使用時(shí)溶于10mlTris緩沖液中，配制成濃度為100μg/mL的定值血清。