[發明專利]高純度甾體生物堿計明胺的制備方法

無效

• 申請號: 201110363836.4
• 申請日: 2011-11-16
• 公開（公告）號: CN102492013A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 王世盛;張士妍;趙偉杰;周雪峰;高志剛;韓旭然
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C07J71/00
• 分類號: C07J71/00
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生

技術領域

本發明涉及天然藥物化學。具體涉及一種以中藥材藜蘆為原料制備高純度甾體生物堿計明胺的方法。

背景技術

藜蘆是百合科(Liliaceae)藜蘆屬(Veratrum)植物，廣泛分布于北半球溫帶，中國有十余種之多。本屬多種植物可供藥用，但多數具有不可忽視的毒性。該屬植物有抗菌，抗真菌和殺滅寄生蟲等作用，可用于治療高血壓、血吸蟲、鉤蟲、絲蟲、中風、癲癇、瘧疾、骨折等疾病。

藜蘆的藥理作用同它的化學成分是密不可分的。藜蘆的化學成分十分復雜，主要包括甾體生物堿化合物、芪類化合物、二肽類、黃酮類及其它類化合物。藜蘆的化學成分中，甾體生物堿是是研究最早，生物學活性研究較深入的一大類組份，其中計明胺衍生物是最主要的活性成分之一。

計明胺(Germine)是白色針狀結晶，無臭，口感微苦，分子式為C₂₇H₄₃O₈N，熔點：221.5～223℃，旋光：(95％乙醇)，(c＝1.13?10％醋酸)。計明胺不溶于水，溶于甲醇。計明胺結構上屬于異甾體生物堿類，結構式如下：

計明胺藥理作用尚未見文獻報道，但其酯類衍生物如計米定、烏蘇瑞寧等藥理作用十分顯著，具有抗血栓、抗凝血、抗血小板聚集等作用。因此，從計明胺出發，通過半合成可以制備出一系列計明胺骨架的酯型生物堿衍生物，獲得了計明胺3、7、15、16位羥基的部分衍生化產物，發現這些衍生物具有更強的抗血栓能力，從而有效的提高計明胺的生物利用度，為計明胺相關新藥的開發提供了廣闊的前景。因此，計明胺的生產制備對更好的利用藜蘆資源具有重要意義。

目前，計明胺制備方法主要是從藜蘆原料中直接提取，經過繁瑣的萃取、層析等分離純化過程而獲得，費時費力，而且消耗大量溶劑。資料表明，藜蘆中的計明胺含量并不高，從藜蘆中直接獲得計明胺收率較低，而計明胺型甾體總生物堿的含量大大高于計明胺，且計明胺型甾體總生物堿的分離純化方法比較成熟，相對簡單，此外計明胺型甾體總生物堿較易水解，因此從計明胺型甾體總生物堿出發進行水解而獲得計明胺是一種有效的途徑。

發明內容

本發明公開了一種以下式表示的甾體生物堿計明胺(Germine)的高純度制備方法。該方法擬在無機堿的水溶液中水解計明胺型甾體總生物堿，具體的是，將藜蘆藥材原料粉碎、乙醇回流提取、干燥得到浸膏、酸溶液溶解、乙醚脫脂、氯仿萃取、濃縮得到藜蘆甾體總生物堿、總生物堿再經堿液水解、結合色譜柱分離工藝制備計明胺，即柱色譜純化、重結晶、干燥，最終制得單體成品，以本方法制成的計明胺純度可達90％以上，產品可用作藥物原料或計明胺衍生物的制備前體。本發明通過下述技術方案實現：

一種高純度甾體生物堿計明胺的制備方法，其具體步驟如下：

A.藜蘆藥材原材料的提取

取藜蘆植物的干燥根莖粉碎后，用體積比為65～95％乙醇回流提取3～4次，每次1～2小時，合并提取液，過濾濃縮至稠膏狀，干燥，得到濃縮物；

B.藜蘆總生物堿的富集

將步驟A得到的濃縮物以其10～12倍質量的酸溶液溶解，得到的溶解液經過濾后用乙醚萃取脫脂，再用堿溶液調pH至8～10，用氯仿萃取，減壓回收溶劑近干得到生物總堿；

其中：所述的酸溶液為1～5wt％酒石酸或5～10wt％鹽酸；

C.藜蘆總生物堿水解

將步驟B得到的生物總堿用質量體積比1∶10～12.5的無水乙醇溶解，在攪拌狀態下，用堿溶液調pH為10～14并保持，在45～75℃水解2～6小時，氯仿萃取，合并有機層，減壓回收溶劑至干燥得粉末；

D.色譜柱純化

將步驟C得到的粉末加入使其剛好溶解的甲醇，并加入與粉末等質量的100～200目硅膠，混勻后烘干，再以粉末∶200～300目硅膠的質量比為1∶30～50的比例裝柱，進行硅膠色譜柱層析，以體積比為40∶1∶0.1的氯仿∶甲醇∶二乙胺為流動相洗脫，薄層層析跟蹤檢測，收集計明胺洗脫液，并減壓濃縮至干，重結晶，過濾，干燥，得到高純度計明胺。

優化的，在上述制備方法中，步驟B中所述的堿溶液為下述溶液中的一種：10wt％NaOH、10wt％KOH、濃氨水。

優化的，在上述制備方法中，步驟B中所述的酸溶液為5wt％酒石酸或10wt％鹽酸。

優化的，在上述制備方法中，步驟C中所述的堿溶液為NaOH溶液或KOH溶液，濃度為0.2～0.6mol/L。

優化的，在上述制備方法中，步驟C中所述濃度為0.4～0.5mol/L。