[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻根際土壤微生物結(jié)構(gòu)變化的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110362485.5
• 申請(qǐng)日: 2011-11-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102344968A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 虞云龍;董斌
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻根際土壤微生物結(jié)構(gòu)變化的方法，包括：

(1)分別采集轉(zhuǎn)基因水稻在分蘗期、抽穗期、灌漿期和成熟期的根際土壤，將根際土壤在20-30℃下風(fēng)干，過(guò)2-3mm篩后溶于緩沖液，得到混合液；

(2)提取混合液中微生物的總DNA，以該總DNA為模板，PCR擴(kuò)增所述微生物的16SrDNAV3片段，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)溫度梯度凝膠電泳分離，染色得到所述微生物的DNA指紋圖譜；

(3)對(duì)各生長(zhǎng)階段轉(zhuǎn)基因水稻根際土壤微生物的DNA指紋圖譜進(jìn)行分析，得到轉(zhuǎn)基因水稻根際土壤微生物的結(jié)構(gòu)變化情況。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的溫度梯度凝膠電泳采用的凝膠溶液為放置30天后的聚丙烯酰胺凝膠溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的溫度梯度凝膠電泳的溫度范圍為42～50℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增所采用的正向引物和反向引物的堿基序列分別如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示。