[發(fā)明專利]一種IgG含量的檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110362205.0
• 申請日: 2011-11-16
• 公開（公告）號: CN102507958A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張慧東;卜英俊;王彬;陳芳;顧培華
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇星馳生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥分析檢測領(lǐng)域，特別涉及一種牛初乳中IgG含量的檢測方法。

背景技術(shù)

牛初乳是母牛產(chǎn)仔后72小時內(nèi)分泌的乳汁，在以往生產(chǎn)實踐中，往往被當(dāng)成沒有作用的東西拋棄，在現(xiàn)今科學(xué)研究中證明，初乳中的IgG含量非常的高，可到達59-80mg/ml，有很高的利用價值。

目前國內(nèi)主要的檢測IgG含量的方法有：單項免疫擴散法、HPLC法、電泳法，但是精確度并不高，有著較大的誤差。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種精確度高、操作簡單的IgG含量的檢測方法。

一種IgG含量的檢測方法，它包括如下步驟：

1、將標(biāo)準(zhǔn)IgG溶于緩沖液中配制成多個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并分別檢測每個標(biāo)準(zhǔn)溶液中的紅細(xì)胞基數(shù)后制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；

2、將樣品IgG與過量濃度的SPA混合反應(yīng)，制備IgG-SPA復(fù)合物；

3、將IgG-SPA復(fù)合物與過量豬血清補體反應(yīng)，產(chǎn)生的補體結(jié)合物與紅細(xì)胞發(fā)生溶血反應(yīng)，計算紅細(xì)胞基數(shù)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對照即得樣品IgG含量。

其中，優(yōu)選地，所述步驟1中標(biāo)準(zhǔn)曲線圖的制作方法如下：首先制備IgG標(biāo)準(zhǔn)溶液：在緩沖液中溶解IgG標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別配制成為1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后通過IgG-SPA結(jié)合反應(yīng)及補體結(jié)合反應(yīng)得到紅細(xì)胞數(shù)量，從而制備標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

其中，優(yōu)選地，步驟2中制備IgG-SPA復(fù)合物的方法為：首先采用緩沖液配制與步驟1中標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)濃度的樣品溶液，放入超聲波清洗機中超聲2-20min，精確吸取20-200ul樣品備用；然后采用緩沖液配制5倍以上IgG樣品溶液濃度的SPA溶液，放入超聲波清洗機中超聲2-20min，精確吸取20-200ul?SPA備用；將備用的IgG與備用的SPA溶液進行對應(yīng)混合，反應(yīng)生成IgG-SPA復(fù)合物。

其中，優(yōu)選地，步驟3中將IgG-SPA復(fù)合物與過量豬血清補體反應(yīng)，產(chǎn)生的補體結(jié)合物與紅細(xì)胞發(fā)生溶血反應(yīng)的步驟為：首先采用緩沖液配制5倍以上IgG樣品溶液濃度的血清補體溶液，放入超聲波清洗機中超聲2-20min，精確吸取20-200ul血清補體溶液備用；然后將步驟2中的IgG-SPA復(fù)合物與備用的血清補體溶液反應(yīng)生成補體結(jié)合物；再精確吸取20-200ul補體結(jié)合物與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞發(fā)生溶血反應(yīng)。

其中，優(yōu)選地，所述的緩沖液為PH6.0的0.2mol/L磷酸鹽緩沖液(Phosphate?Buffer，PB)。

有益效果：本發(fā)明通過IgG分子的Fc段與SPA(Staphylococcal?protein?A)葡萄球菌A蛋白發(fā)生結(jié)合，產(chǎn)生的復(fù)合物可與標(biāo)準(zhǔn)豬血清中的補體發(fā)生補體結(jié)合反應(yīng)，使特定濃度的紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)液發(fā)生溶血反應(yīng)，通過紅細(xì)胞計數(shù)對比來檢測IgG含量，該檢測方法檢測結(jié)果精確，成功彌補了IgG檢測領(lǐng)域中不同檢測方法誤差大的缺點，能精確的檢測初乳IgG的含量，對產(chǎn)品的開發(fā)和品質(zhì)有著至關(guān)重要的作用，同樣此方法可以應(yīng)用到其他免疫蛋白的檢測中，對其他生物制藥行業(yè)及保健品行業(yè)有著重要的推動作用。

附圖說明

圖1為實施例1的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，其以標(biāo)準(zhǔn)液濃度C(mg/ml)為橫坐標(biāo)，以紅細(xì)胞基數(shù)N(個)為縱坐標(biāo)，

其中，A點為實施例1中紅細(xì)胞基數(shù)與對應(yīng)濃度的坐標(biāo)點；

圖2為實施例2的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，其以標(biāo)準(zhǔn)液濃度C(mg/ml)為橫坐標(biāo)，以紅細(xì)胞基數(shù)N(個)為縱坐標(biāo)，

其中，B點為實施例2中紅細(xì)胞基數(shù)與對應(yīng)濃度的坐標(biāo)點；

圖3為實施例3的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，其以標(biāo)準(zhǔn)液濃度C(mg/ml)為橫坐標(biāo)，以紅細(xì)胞基數(shù)N(個)為縱坐標(biāo)，

其中，C點為實施例3中紅細(xì)胞基數(shù)與對應(yīng)濃度的坐標(biāo)點。

具體實施方式

下述實施例中緩沖液的配制方法：0.2mol/L的磷酸氫二鈉和0.2mol/L磷酸二氫鈉，按照7∶1的體積比混合成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液，PH值調(diào)至6.0。

標(biāo)準(zhǔn)IgG采用Sigma公司提供的純度≥95％的IgG標(biāo)準(zhǔn)品。

IgG標(biāo)準(zhǔn)溶液采用標(biāo)準(zhǔn)IgG與磷酸鹽緩沖液按照濃度1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml分別配置。

實施例1

一種IgG含量的檢測方法，其包括如下步驟：