[發明專利]一種免疫親和層析介質的制備方法及在純化河豚毒素中的應用無效
申請號: | 201110361403.5 | 申請日: | 2011-11-15 |
公開(公告)號: | CN102407098A | 公開(公告)日: | 2012-04-11 |
發明(設計)人: | 余勃;馬春燕;陸豫 | 申請(專利權)人: | 南昌大學 |
主分類號: | B01J20/24 | 分類號: | B01J20/24;B01J20/26;B01J20/281;B01J20/30;B01D15/08;C07K1/22 |
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摘要: | |||
搜索關鍵詞: | 一種 免疫 親和 層析 介質 制備 方法 純化 河豚毒素 中的 應用 | ||
1.一種免疫親和層析介質的制備方法,其特征是由固相載體和河豚毒素特異性抗體組成,包括以下步驟:
(1)先將固相載體經溴化氰法活化;
(2)取河豚毒素特異性抗體與溶脹后的活化固相載體置于pH?6.0-7.5,0.1-0.5?mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液中在室溫下振蕩偶聯,其中抗體與溶脹后的活化固相載體的質量比為1:?100;
(3)將上述偶聯凝膠產物轉入其5-10?倍體積的pH?6.0-7.5,含有0.1-0.5?mol/L?醋酸的Tris-HCl緩沖液中,室溫下振蕩反應2?h進行封閉;最后用5-10?倍于封閉后凝膠體積的pH?6.0-7.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液洗滌2-4?次;
所述的固相載體可為交聯葡聚糖、聚丙烯酰胺凝膠、交聯瓊脂糖或多孔玻璃等。
2.根據權利要求1所述的免疫親和層析介質的制備方法,其特征是固相載體為交聯瓊脂糖。
3.權利要求1所述的免疫親和層析介質的制備方法制備的免疫親和層析介質用于河豚毒素純化的方法,包括以下步驟:
(1)含有河豚毒素的樣品前處理;
(2)河豚毒素免疫親和層析柱的制備:
將得到的免疫親和介質填充入固相萃取柱中,加入pH?6.0-7.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液后自然沉降,制成河豚毒素特異性抗體免疫親和柱,于4℃保存待用;
(3)上樣,將含河豚毒素樣品以每分鐘1-4ml?的流速通過預先用緩沖液平衡好的裝有上述免疫親和層析介質的層析柱;
所說的緩沖液平衡免疫親和層析柱包括如下步驟:將pH6.0-7.0?的緩沖液以每分鐘1-4ml?的流速通過裝有免疫親和層析介質的層析柱,用量為層析柱體積的3-10?倍,通過紫外檢測保證層析柱己平衡至基線;
(4)洗脫,然后用?pH6.0-7.0的緩沖液清洗上樣后的免疫親和層析柱,再用pH?為4.5-6.5?的洗脫液以每分鐘1-4ml?的流速將河豚毒素從層析柱上洗脫并收集洗脫峰,洗脫液的用量為層析柱體積的3-10倍;
(5)收集洗脫液;
所述的河豚毒素純化方法步驟(3)、(4)中的pH6.0-7.0?的緩沖液選自PBS、Tris-HCl、醋酸-醋酸鈉緩沖液中的一種或兩種以上,所述的pH?為4.5-6.5的洗脫液選自醋酸-醋酸納、檸檬酸-檸檬酸納緩沖液中的一種或兩種以上。
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