[發明專利]一種具有三螺旋結構的活性膠原的制備方法

有效

• 申請號: 201110361034.X
• 申請日: 2011-11-15
• 公開（公告）號: CN102391374A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 任偉業
• 申請（專利權）人: 無錫貝迪生物工程有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 張水俤

1.一種具有三螺旋結構的活性膠原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：原料預處理、除脂、酸酶結合處理、超聲波處理、H₂O₂溶液處理、酸溶鹽析純化、透析純化、干燥。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的原料為選自新鮮豬皮、牛皮、牛跟腱中的一種。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的酸酶結合處理為：經過預處理的原料浸入0.6～0.7mol/L冰醋酸和600～700mg/L胃蛋白酶的混合液中，持續攪拌25～30小時左右。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的超聲波處理優選采用漸進式超聲波處理，先使用100～200W超聲處理30分鐘，再使用200～300W超聲處理30分鐘，最后使用300～400W超聲處理1小時。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)取新鮮豬皮，切割清除油脂層和毛皮層，去除雜質，清洗，將豬皮破碎成小顆粒狀，按照固液比1∶30～1∶40的比例，加入0.01～0.03mol/L的氫氧化鈉水溶液，于6～8℃浸泡1～2小時，過濾，備用。

(2)在上述預處理后的豬皮中加入質量為豬皮質量6～8倍的無水乙醚或者丙酮，于35～40℃回流5-8小時，之后用蒸餾水沖洗至無異味，備用。

(3)將上述豬皮浸入0.6～0.7mol/L冰醋酸和600～700mg/L胃蛋白酶的混合液中，持續攪拌25～30小時左右。

(4)對上述混合物采用漸進式超聲波處理，先使用100～200W超聲處理30分鐘，再使用200～300W超聲處理30分鐘，最后使用300～400W超聲處理1小時。

(5)加入2～3％的H₂O₂溶液，混合靜置2～4小時，調節pH至5.0，離心。

(6)取上清液，加入NaCl，攪拌20-30小時，離心，沉淀物加入0.6-0.7moL/L冰醋酸溶解，離心，取上清液，調節pH至7.5，加入NaCl，攪拌20-30小時，離心。

(7)將步驟(6)得到的沉淀物溶解于0.6～0.7moL/L冰醋酸，先以0.6～0.7moL/L的冰醋酸為透析外液透析2次，每次4小時，再以蒸餾水為透析外液透析5～7次，每次4小時，至外液檢測不到氯離子，得到膠原液體。

(8)將上述液體冷凍干燥，得到具有三螺旋結構活性的膠原。