[發明專利]一種花藥特異表達啟動子及其應用有效

申請號：	201110360123.2	申請日：	2011-11-14
公開（公告）號：	CN102465128A	公開（公告）日：	2012-05-23
發明（設計）人：	韓斌;劉曉輝;上官穎穎;朱靜潔;陸怡祺;嚴怡雯;陸婷婷	申請（專利權）人：	中國科學院上海生命科學研究院
主分類號：	C12N15/113	分類號：	C12N15/113;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/82;C12N15/84;A01H5/02
代理公司：	上海專利商標事務所有限公司 31100	代理人：	陳靜
地址：	200031 上***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種花藥特異表達啟動子及其應用
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于生物技術和植物學領域；更具體地，本發明涉及一種花藥特異表達啟動子及其應用。

背景技術

人類通過對自然突變基因和重組體的選擇與利用，對作物的品種進行改良已有近千年的歷史。近百年來，通常采用人工雜交的方法，實現優良基因的重組和外源基因的導入培育作物新品種。雜交育種技術能夠實現種內基因轉移，但是，親緣關系較遠的品種之間的基因轉移則存在障礙；另一方面，雜交育種技術不能準確選擇和操縱某個基因，因此，增加了育種結果的復雜性。

通過轉基因的手段進行作物品種的選育，其優勢在于轉基因不受生物體間親緣關系的限制，從轉基因的技術角度來講，候選轉化的基因來源幾乎不受限制；因此，本發明人可以通過轉基因的手段聚合各種有效基因，培育高產、優質、抗逆的作物新品種。另一方面，轉基因技術所操作和轉移的基因是功能明確、控制目標性狀的基因，因此，轉基因后代的表型更具有可預見性。目前，轉基因技術已經成為作物品種改良的重要手段，轉基因大豆、玉米、棉花和油菜的種植面積已達4種作物全球總種植面積的25％(James，2005；Sankula?et?al.，2005)。

在植物的轉基因中需要兩個必需的元件，即啟動子和目的基因。啟動子是位于基因轉錄起始位點上游的順式調控序列，與反式作用的識別因子結合，通過識別因子與RNA聚合酶的相互作用，啟動基因的轉錄；因此，啟動子調控基因的表達模式，即目的基因表達的時空特異性及表達的強度，是轉基因成敗或成效高低的關鍵因素之一。

針對轉基因的目的不同，轉化的基因選擇不同的表達模式，主要包括組成型高表達、組織特異性表達及誘導型表達等。如在棉花、玉米、水稻等農作物中轉入蘇云金芽孢桿菌(Bacillus?thuringiensis，Bt)的抗蟲蛋白采用的是組成型高表達的方式，在作物中高劑量表達Bt抗蟲蛋白的優勢在于高劑量可以確保殺蟲的效果，同時有利于延長Bt抗蟲蛋白的有效期。在金稻谷(Golden?rice)的創制過程中，其目標是通過在水稻胚乳中引入了維生素A前體的合成途徑，從而在稻米中強化維生素A，解決維生素A營養缺乏的問題；因此，轉基因時采用的啟動子為在水稻胚乳中特異表達的谷蛋白啟動子。在植物抗病基因的轉化中，常采用病原菌誘導表達的啟動子。

隨著轉基因農作物在全球的大面積推廣，啟動子在轉基因中的重要性得到廣泛的共識，本發明人需要不同類型的啟動子幫助本發明人提供轉基因表達模式的解決方案。例如，在水稻組織特異啟動子的研究領域中，人們最為關注的是花藥特異的啟動子。水稻花藥是水稻雄性配子花粉產生的器官，與水稻穗的發育、育種及水稻的產量等密切相關。

因此，本領域需要進一步研究植物花藥特異性表達的啟動子，以用于在花藥中特異性表達一些功能基因或結構基因，達到品種改良的目的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種花藥特異表達啟動子及其應用。

在本發明的第一方面，提供一種分離的多核苷酸(啟動子)，所述的多核苷酸：

(a)位于osigcfa001g12基因(GenBank登錄號：CT833313)的5’端及其上游；

(b)堿基長度為200-2000個；

(c)具有引發轉錄的必要位點及轉錄起始點；且

(d)具有在植物花藥中特異表達功能。

在本發明的一個優選例中，所述的osigcfa001g12基因來源于禾本科植物；更佳地來源于水稻(Oryza?Sativa)。

在本發明的一個優選例中，(a)中，位于osigcfa001g12基因上游-1000至編碼區第100位。

在本發明的另一優選例中，所述的多核苷酸是：

(1)SEQ?ID?NO：1中第1-521位所示的核苷酸序列的多核苷酸；