[發明專利]一種花藥特異表達啟動子及其應用

有效

• 申請號: 201110360123.2
• 申請日: 2011-11-14
• 公開（公告）號: CN102465128A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發明（設計）人: 韓斌;劉曉輝;上官穎穎;朱靜潔;陸怡祺;嚴怡雯;陸婷婷
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/82;C12N15/84;A01H5/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸：

(a)位于osigcfa001g12基因的5’端及其上游；

(b)堿基長度為200-2000個；

(c)具有引發轉錄的必要位點及轉錄起始點；且

(d)具有在植物花藥中特異表達功能。

2.如權利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸是：

(1)SEQ?ID?NO：1中第1-521位所示的核苷酸序列的多核苷酸；

(2)SEQ?ID?NO：1中第1-552位所示的核苷酸序列的多核苷酸；

(3)(1)或(2)任一限定的多核苷酸，其中第1-22位堿基缺失；

(4)由SEQ?ID?NO：1中(1-22)～(521-552)位所示的核苷酸序列構成的多核苷酸；

(5)核苷酸序列在嚴格條件下能夠與(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列雜交且具有指導目的基因在植物花藥中特異表達功能的多核苷酸；

(6)核苷酸序列與(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列有80％以上同源性且具有指導目的基因在植物花藥中特異表達功能的多核苷酸；或

(7)核苷酸序列與(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列完全互補的多核苷酸。

3.如權利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸是：

基于SEQ?ID?NO：1中第1-521位或SEQ?ID?NO：1中第1-552位所示核苷酸序列，第436-442位、第146-153位、第278-283、第305-311位和/或第287-312位核苷酸序列不變，其它位點與(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列具有50％以上相同性的，且具有指導目的基因在植物花藥中特異表達功能的多核苷酸。

4.如權利要求2或3所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸是：基于SEQ?ID?NO：1中第1-521位或SEQ?ID?NO：1中第1-552位所示核苷酸序列，第99-104位、第115-120位和/或第131-138位核苷酸序列不變，其它位點與(1)-(4)任一限定的多核苷酸序列具有50％以上相同性的，且具有指導目的基因在植物花藥中特異表達功能的多核苷酸。

5.權利要求1-4任一所述的多核苷酸的用途，用于指導目的基因在植物花藥中特異表達。

6.一種載體，其特征在于，所述的載體含有權利要求1-4任一所述的多核苷酸，作為啟動子元件。

7.如權利要求6所述的載體，其特征在于，所述的載體還含有與所述的多核苷酸操作性連接的目的基因。

8.如權利要求6所述的載體，其特征在于，所述的目的基因位于所述多核苷酸的下游，且與所述多核苷酸的間隔小于1000bp。

9.一種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，所述的細胞：

含有權利要求5所述的載體；或

其基因組中整合有外源的權利要求1-4任一所述的多核苷酸。

10.一種使目的基因在植物花藥中特異表達的方法，其特征在于，所述的方法包括：

將構建物轉化植物細胞，所述的構建物含有權利要求1-4任一所述的多核苷酸以及與所述的多核苷酸操作性連接的目的基因；

篩選出轉入了所述構建物或染色體中整合有所述構建物的植物細胞；和

將所述植物細胞再生成植株。

11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(a)提供攜帶表達載體的農桿菌，所述表達載體中含有構建物，所述的構建物含有權利要求1-4任一所述的多核苷酸以及與所述的多核苷酸操作性連接的目的基因；

(b)將植物細胞、組織或器官與步驟(a)中的農桿菌接觸，從而使所述的構建物轉入植物細胞。