[發明專利]過表達單一MicroRNA成熟體序列的新方法

有效

• 申請號: 201110359200.2
• 申請日: 2011-11-14
• 公開（公告）號: CN103103189A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 沈南;曲波
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種表達單一microRNA成熟體的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供一種表達構建物，所述的表達構建物含有以下結構：

5’Seq_正向-Y-Seq_反向3’????(I)；

其中，Seq_反向為該單一microRNA成熟體相應的DNA序列；Seq_正向為與Seq_反向互補的序列；Y為位于Seq_正向和Seq_反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seq_正向和Seq_反向不互補；式I所示的結構可形成如下所示的二級結構：

其中，“|”表示在Seq_正向和Seq_反向中，相應的核苷酸是配對的，在Seq_正向和Seq_反向之間形成氫鍵；表示在Seq_正向和Seq_反向中，相應的核苷酸不配對；并且，“|”和的分布構成了Seq_反向與Seq_正向的互補；

(2)將(1)的表達構建物轉化細胞，從而表達單一microRNA成熟體。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，式I所示的結構進入細胞并被胞內加工后，基于Seq_反向結構表達所述的單一microRNA成熟體，基于Seq_正向結構表達與另一microRNA成熟體不同的RNA，其不具備另一microRNA成熟體的活性。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，式(II)中，以Seq_正向為參照，存在于與該Seq_正向序列的特定位點上，該特定位點對應于所述另一microRNA成熟體發揮活性的關鍵位點。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，式(II)中，以Seq_正向為參照，存在于該序列的5’端第2-10位；且存在的個數為0-5個。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的Seq_正向具有SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列；和/或

所述的Seq_反向具有SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列；和/或

所述的Y具有SEQ?ID?NO：3所示的核苷酸序列。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，式(I)結構的序列選自：

SEQ?ID?NO：4中第8-60位所示核苷酸序列；或

SEQ?ID?NO：4中第8-62位所示核苷酸序列；或

SEQ?ID?NO：4中第6-62位所示核苷酸序列；或

SEQ?ID?NO：4中第5-66位所示核苷酸序列。

7.一種表達單一microRNA成熟體的表達構建物，所述的表達構建物含有以下結構：

5’Seq_正向-Y-Seq_反向3’????(I)；

其中，Seq反向為該單一microRNA相應的DNA序列；Seq_正向為與Seq_反向互補的序列；Y為位于Seq_正向和Seq_反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seq_正向和Seq_反向不互補；式I所示的結構在可形成如下所示的二級結構：

其中，“|”表示在Seq_正向和Seq_反向中，相應的核苷酸是配對的，在Seq_正向和Seq_反向之間形成氫鍵；表示在Seq_正向和Seq_反向中，相應的核苷酸不配對；并且，“|”和的分布構成了Seq_反向與Seq_正向的互補。