[發明專利]一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法

無效

• 申請號: 201110359146.1
• 申請日: 2011-11-14
• 公開（公告）號: CN102406927A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 趙志鵬;侯文禮
• 申請（專利權）人: 成都康華生物制品有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14;C12N7/00
• 代理公司: 四川省成都市天策商標專利事務所 51213
• 代理人: 劉興亮

1.一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：依次包括以下步驟：

步驟一：人二倍體細胞株的復蘇和傳代培養：人二倍體細胞株經復蘇、轉瓶傳代培養2～3代后，消化細胞并制備細胞懸液；

步驟二：人二倍體細胞株的多級生物反應器培養；將經復蘇、傳代培養和消化后制成的人二倍體細胞懸液進行二級以上的生物反應器線性放大技術培養；

步驟三：接種乙型腦炎病毒毒株，進行病毒增殖培養：生物反應器線性放大技術培養的最終生物反應器內的細胞密度達到10⁶個/ml以上后，將細胞生長液更換為病毒維持液，并將乙型腦炎病毒毒株接種至其中，進行病毒增殖培養；

步驟四：收獲病毒培養液：更換病毒維持液24小時后，收獲病毒培養液，同時每天抽樣檢測病毒培養液的滴度，每批次的培養液收獲15～25天；

步驟五：收獲的病毒培養液經滅活、超濾、純化和添加保護劑后，配制疫苗。

2.根據權利要求1所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述的人二倍體細胞株為WI-38，MRC-5，2BS，KMB17中的任一種，所述的乙型腦炎病毒毒株為P3株或SA14-14-2株。

3.根據權利要求1所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述的生物反應器為攪拌式生物反應器或搖擺式氣液交替培養生物反應器。

4.根據權利要求1所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述病毒維持液為BME病毒維持液，所述保護劑為糖蛋白保護劑。

5.根據權利要求1所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述步驟二的每一級的生物反應器中的人二倍體細胞株達到10⁶個/ml以上的細胞密度后，消化，洗脫，離心沉淀，收集及重懸細胞，并按照放大比例通過密閉的管路系統接種至下一級生物反應器培養。

6.根據權利要求5所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述步驟二的每一級生物反應器中加入供細胞貼附的微載體和細胞懸液，所述一級生物反應器中加入的細胞懸液濃度為10⁶個/ml以上，所述一級生物反應器培養的工作體積約10L，所述的放大比例為前一級生物反應器工作體積的10～20倍。

7.根據權利要求6所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述的每一級生物反應器中加入的微載體為顆粒狀實心微球載體、多孔性微球載體、網狀纖維結構載體和片狀纖維結構載體中的任一種。

8.根據權利要求1所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述步驟四收獲病毒培養液的方式為間隔式收獲培養液或連續灌注式收獲培養液。

9.根據權利要求4或8所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述的間隔式收獲培養液具體為：間隔24～48小時收獲培養體積80％～90％的病毒培養液后，繼續補加BME維持液至原培養體積。

10.根據權利要求4或8所述的一種人二倍體細胞乙型腦炎滅活疫苗的生產方法，其特征在于：所述的連續灌注式收獲培養液具體為：每天連續流出病毒培養液，并每天收獲工作體積80％～90％的病毒培養液，同時連續等量補加BME維持液。