[發明專利]采用金屬氧化物富集糖肽的通用方法

無效

• 申請號: 201110358235.4
• 申請日: 2011-11-11
• 公開（公告）號: CN103105327A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 李秀玲;閆竟宇;梁鑫淼
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N1/40
• 分類號: G01N1/40;G01N1/34
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.利用金屬氧化物富集純化糖肽的通用方法，其特征在于：

采用金屬氧化物材料與糖蛋白酶解物接觸，調整淋洗和洗脫條件，選擇性富集糖肽；

所述金屬氧化物材料包括氧化鈦、氧化鋯、氧化鋁、或者這些金屬的復合金屬氧化物中的一種或二種以上，金屬氧化物材料的粒徑大小為0.2-100微米，孔道直徑大小為1-100納米；

這些金屬的復合金屬氧化物是指金屬鈦、鋯、鋁中二種或三種的復合金屬氧化物。

2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于：

具體操作采用固相萃取模式或離心模式；

在固相萃取(SPE)模式下采用金屬氧化物材料富集糖肽時，將糖蛋白酶解物上到以金屬氧化物材料為填料的SPE柱上，采用淋洗溶液沖洗去除非糖肽后，利用洗脫溶液富集出糖肽；

或在離心模式下采用金屬氧化物材料富集糖肽時，將糖蛋白酶解物與金屬氧化物直接混合，采用淋洗溶液在離心方式下去除非糖肽后，利用洗脫溶液在離心方式下富集出糖肽。

3.按照權利要求2所述糖肽富集方法，其特征在于：

樣品的上樣量為金屬氧化物材料與糖蛋白酶解物質量比例為3-200∶1，上樣溶液的pH為2-6；富集溫度為15-60℃；糖蛋白可以是免疫球蛋白、胎球蛋白、核糖核酸酶B和轉鐵蛋白中一種或二種以上。

4.按照權利要求2或3所述糖肽富集方法，其特征在于：

去除非糖肽時采用的淋洗溶液是體積濃度為0-50％的乙腈、甲醇或乙醇溶液，pH?7-10；

洗脫糖肽是采用的洗脫溶液是體積濃度為0-50％的乙腈、甲醇或乙醇溶液，pH?10.1-14。

5.按照權利要求4所述糖肽富集方法，其特征在于：

采用2～50倍金屬氧化物材料柱體積的淋洗溶液去除非糖肽，淋洗2-20次；

采用2～50倍金屬氧化物材料柱體積的洗脫溶液富集糖肽，洗脫2-20次。

6.按照權利要求2所述糖肽富集方法，其特征在于：

采用離心模式，

1)糖蛋白酶解物直接與金屬氧化物材料孵化時間0.5分鐘-1小時，離心，棄上層溶液，收集沉淀；

2)離心后的金屬氧化物材料與淋洗溶液孵化時間0.5分鐘-1小時，離心，收集沉淀；此過程重復1-10次；

3)離心后的金屬氧化物材料與洗脫溶液孵化時間0.5分鐘-1小時，離心，收集上清液；此過程重復1-10次。

7.按照權利要求2所述糖肽富集方法，其特征在于：

采用萃取模式，

1)將氧化鈦裝入萃取柱中，采用沖洗液平衡柱子，將pH?2-6糖蛋白酶解物上到柱上，金屬氧化物材料與糖蛋白酶解物重量比例為10-200∶1；

2)采用2-50倍金屬氧化物材料柱體積的pH?7-10的0-50％淋洗溶液沖洗，去處非糖肽；重復此步驟1-10次；

3)采用2-50倍金屬氧化物材料柱體積的pH?10.1-14的0-50％洗脫溶液洗脫糖肽；重復此步驟1-10次。