[發明專利]抑制HIV-1的雙長發卡結構RNA表達原件的構建及功能檢測

無效

• 申請號: 201110357481.8
• 申請日: 2011-11-11
• 公開（公告）號: CN102352360A
• 公開（公告）日: 2012-02-15
• 發明（設計）人: 劉暢;孔曉紅;梁之聘;袁青;刁丹紅
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/85;C12Q1/68
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.抑制HIV-1的雙長發卡結構RNA表達原件(dlhRNA-VGTE)的基因序列，是序列表SEQ?ID?No.1所示的序列；該表達原件在真核細胞中，通過聚合酶的作用，轉錄成RNA，折疊成為dlhRNA的二級結構，在核酸酶Dicer的作用下，被切割成為四個獨立的siRNA(19nt)分別行使RNA干擾作用。

2.如權利要求1所述的序列，其特征在于，根據HIV-1序列保守性和RNAi靶序列特點，分別選擇了HIV的4個基因：2個結構基因env，gag和2個調節基因vpu，tat作為抑制靶點，設計選取權利要求1所述序列靶向HIV-1的如下四個RNAi靶序列：

上述序列用Blast在線進行同源分析證實為HIV-1保守序列。

3.如權利要求1所述雙長發卡結構RNA表達原件(dlhRNA-VGTE)序列的構建方法，其特征在于，過Two-step?PCR法獲得(long?hairpin?RNA，lhRNA)長發卡RNA表達原件，再以lhRNA為模板經過Two-step?PCR法獲得(double?long?hairpin?RNA，dlhRNA)雙長發卡RNA表達原件；最終構建含有dlhRNA-VGTE表達原件的質粒pGMT-dlhRNA-VGTE。

4.檢測如權利要求1所述雙長發卡結構RNA表達原件(dlhRNA-VGTE)序列功能所需的HIV基因EGFP融合蛋白表達質粒pGag-EGFP/pEnv-EGFP/pTat-EGFP/pVpu-EGFP。