[發明專利]四環素半抗原及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201110356497.7
• 申請日: 2011-11-11
• 公開（公告）號: CN103102300A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 何方洋;馮才偉;孫震;吳鵬;趙正苗;陳煒玲;劉琳
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: C07D211/62
• 分類號: C07D211/62;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/75;C07K14/435;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/577;G01N21/31;G01N33/535
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1.一種四環素半抗原，其特征在于分子結構式為：

。

2.一種制備權利要求1所述四環素半抗原的方法，其特征在于四環素半抗原是通過四環素與4-哌啶甲酸利用曼尼希反應，在四環素的酰胺的胺基上引入了N-甲基-4-哌啶甲酸基團所得到的衍生物。

3.一種四環素類藥物抗原，其是由權利要求1所述的四環素半抗原與載體蛋白偶聯得到，其特征在于分子結構式為：

。

4.如權利要求3所述的四環素類藥物抗原，其制備方法包括如下步驟：

取四環素半抗原用二甲基甲酰胺(DMF)溶解，冷卻至10℃，加入氯甲酸異丁酯，10℃攪拌反應30min，得到溶液A；取偶聯的載體蛋白用50mmol/L?Na₂CO₃溶解，與溶液A混合，10℃反應4h，然后4℃過夜，得到溶液B；溶液B用0.01mol/L磷酸鹽緩沖溶液(PBS)4℃透析3天，每天換3次透析液，以除去未反應的小分子物質，得到免疫原，分裝，于-20℃保存備用。

取四環素半抗原溶解于DMF中；取碳化二亞胺(EDC)用0.2ml水充分溶解后加入上述溶液中，室溫下攪拌24h，即可得到反應液A；稱取偶聯的載體蛋白使之充分溶解在PBS(pH?7.2)中，將反應液A逐滴緩慢滴加到蛋白溶液中，并于室溫下攪拌24h，得到反應液B；反應液B用0.01mol/L?PBS?4℃透析3天，每天換3次透析液，以除去未反應的小分子物質，得到包被原，分裝，于-20℃保存備用。

5.一種四環素類藥物抗體，其是由四環素類藥物免疫原免疫動物制備得到。

6.如權利要求5所述的抗體，其特征在于所述抗體為四環素類藥物單克隆抗體。

7.一種由權利要求5-6任一項所述的抗體制備的四環素類藥物酶聯免疫試劑盒。

8.如權利要求7所述的四環素類藥物酶聯免疫試劑盒，其特征在于：四環素類藥物為四環素、金霉素、土霉素、強力霉素、米諾環素、去甲金霉素、吡甲四環素。?

9.一種四環素類藥物酶聯免疫試劑盒檢測動物源性食品中四環素類藥物殘留的應用。?