[發(fā)明專(zhuān)利]鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體及其制備與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110354392.8
• 申請(qǐng)日: 2011-11-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103102403A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張景海;鄧?yán)?/a>;崔勇;趙勇山;宋永波;趙明沂;劉巖峰;張嶸;吳春福
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 沈陽(yáng)藥科大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/435
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/435;C12N15/63;A61K38/17;A61P29/00
• 代理公司: 沈陽(yáng)杰克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 李宇彤

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體及其獲得方法與應(yīng)用，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體及其衍生物、類(lèi)似物、活性片段的結(jié)構(gòu)及其制備方法，以及作為鎮(zhèn)痛藥物在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

????在專(zhuān)利—鎮(zhèn)痛活性肽GRR及其制備與應(yīng)用（申請(qǐng)人：沈陽(yáng)藥科大學(xué)；發(fā)明人：張景海等；專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)枺?01010107462.5；申請(qǐng)公布號(hào)：CN101880319?A）中并未提及其突變體的及其衍生物的研究，而利用生物技術(shù)發(fā)現(xiàn)并獲得了鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體及其衍生物、類(lèi)似物、活性片段是一項(xiàng)較新的技術(shù)，目前尚無(wú)人研究。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體及其衍生物、類(lèi)似物、活性片段以及其制備與應(yīng)用。具體是利用生物技術(shù)，在鎮(zhèn)痛活性肽GRR的基礎(chǔ)上篩選獲得鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體及其衍生物、類(lèi)似物、活性片段；鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體的鎮(zhèn)痛生物活性較鎮(zhèn)痛活性肽GRR具有顯著提高的發(fā)明屬性。鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體及其衍生物、類(lèi)似物、活性片段獲得方法簡(jiǎn)單易行，可與任何載體混合制備醫(yī)學(xué)上可接受的劑型。本發(fā)明是利用生物技術(shù)或化學(xué)合成技術(shù)解決獲得方法，獲得仍具有鎮(zhèn)痛活性的鎮(zhèn)痛活性肽GRR兩個(gè)突變體及其衍生物、類(lèi)似物、活性片段。

本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，它包括：針對(duì)鎮(zhèn)痛活性肽GRR的鎮(zhèn)痛活性，利用基因工程技術(shù)獲得一系列鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體及其部分片段或衍生物或類(lèi)似物，通過(guò)獲得表達(dá)產(chǎn)物的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)鎮(zhèn)痛活性，以獲得可以進(jìn)一步開(kāi)發(fā)鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物的鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體及其部分片段或衍生物或類(lèi)似物。本發(fā)明所述的獲得方法常規(guī)、簡(jiǎn)單、產(chǎn)量高，不僅具有重要的指導(dǎo)意義和實(shí)用價(jià)值，也為工業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

本發(fā)明是針對(duì)鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體的鎮(zhèn)痛活性，利用基因工程技術(shù)獲得一系列鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體部分片段或衍生物或類(lèi)似物，通過(guò)獲得表達(dá)產(chǎn)物的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)鎮(zhèn)痛活性，以獲得可以進(jìn)一步開(kāi)發(fā)鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物的鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體及其部分片段或衍生物或類(lèi)似物。

本發(fā)明提供多種鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體及其部分片段或衍生物或類(lèi)似物的制備方法，它包括：利用基因工程技術(shù)進(jìn)行表達(dá)或通過(guò)化學(xué)合成獲得?；蚬こ碳夹g(shù)方法包括：

⑴將鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體及其部分片段或衍生物或類(lèi)似物的編碼DNA重組至表達(dá)載體；

⑵用步驟⑴的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞（原核或真核細(xì)胞）；

⑶在適合的誘導(dǎo)表達(dá)條件下，培養(yǎng)步驟⑵的被轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞；

⑷收獲并純化所得到的表達(dá)產(chǎn)物。

本發(fā)明提供上述鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體及其部分片段或衍生物或類(lèi)似物的表達(dá)產(chǎn)物分離純化方法。可使用鹽析沉淀、超濾、離子交換層析、疏水作用層析和凝膠過(guò)濾等方法，從細(xì)胞的溶胞產(chǎn)物及培養(yǎng)液中分離并純化所需的表達(dá)產(chǎn)物。在表達(dá)產(chǎn)物的分離和純化過(guò)程中，可使用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)或蛋白免疫印跡法(WESTERN)檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物的存在及相應(yīng)分子大小。

本發(fā)明首次進(jìn)行上述鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體及其部分片段或衍生物或類(lèi)似物的體內(nèi)鎮(zhèn)痛生物學(xué)活性實(shí)驗(yàn)。

本發(fā)明還提供了上述鎮(zhèn)痛活性肽GRR突變體及其部分片段或衍生物或類(lèi)似物在生物制藥領(lǐng)域的應(yīng)用，具體地說(shuō)是鎮(zhèn)痛生物活性。

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供含有如上限定的蛋白質(zhì)及一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物?？砂凑罩扑幑I(yè)領(lǐng)域已知的基本原則和方法制備適于胃腸道外途徑給藥的藥物組合物(如參見(jiàn)Remington’s?Pharmaceutical?Science,?15th.,?Mack?Publishing?Company,?1980)?？赏ㄟ^(guò)各種給藥途徑，特別是靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、腹腔內(nèi)、鼻內(nèi)、皮內(nèi)、皮下等胃腸道外途徑投用本發(fā)明的藥物組合物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供如上限定的蛋白質(zhì)在生產(chǎn)鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用?？墒褂帽景l(fā)明的蛋白或含有該蛋白質(zhì)的藥物組合物作為治療劑，用于治療特定類(lèi)型人體的各種疼痛相關(guān)疾病。本發(fā)明的藥物組合物的治療有效劑量一般應(yīng)根據(jù)疾病的性質(zhì)、嚴(yán)重程度及對(duì)藥物的敏感適應(yīng)性，以及給藥途徑等諸多因素由臨床醫(yī)生按照個(gè)體化原則來(lái)確定。

在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”包括原核細(xì)胞和真核細(xì)胞，常用的原核宿主細(xì)胞的例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細(xì)胞包括酵母細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞等。

附圖說(shuō)明：