[發明專利]人CRYBB1基因突變及其用途

有效

• 申請號: 201110354279.X
• 申請日: 2011-11-10
• 公開（公告）號: CN102382889A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 嚴明;鄭芳;饒艷;楊娜;周新;熊陳嶺
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 薛玲

技術領域

本發明涉及人CRYBB1的基因突變和分析人CRYBB1基因的突變的方法，以及此突變在白內障中輔助診斷的用途。

背景技術

晶狀體蛋白首先在1893年由發現[C.T.，Untersuchungen?der.Proteinsubstanzen?in?den?lichtbrechenden?Medien?des?Auges.Z.Physiol.Chem.1893；18：61-106]。它是脊椎動物晶狀體最主要的結構蛋白，占晶狀體蛋白質總量的90％。晶狀體蛋白有特殊的空間結構，這對于維持晶狀體的透明性有非常重要的作用。晶狀體蛋白根據分子量由大到小，可分為α-，β-，γ-晶狀體蛋白。

β-晶狀體蛋白(Beta?crystallin，CRYB)可分為酸性蛋白(βA)及堿性蛋白(βB)兩個亞組，每個亞組分別由3個基因編碼(CRYBA1，2，3；CRYBB1，2，3)[Jochen?Graw.Genetics?of?crystallins：Cataract?and?beyond.Exp.Eye?Res.2009；88：173-189]。其中位于22q11的編碼βB1-晶狀體蛋白的基因CRYBB1和位于22q11.2的編碼βB2-晶狀體蛋白的基因CRYBB2突變與先天性白內障的發生關系極其密切[Wang?J.，Ma?X.，Gu?F.，Liu?N.，Hao?X.，Wang?K，Wang?N?and?Zhu?S.A?missense?mutation?S228P?in?the?CRYBB1?gene?causes?autosomal?dominant?congenital?cataract.Chin.Med.J.2007；120(9)：：820-824.，Yang?J.，Zhu?Y，Gu?F，He?X，Cao?Z，Li?X，Tong?Y，Ma?X.A?novel?nonsense?mutation?in?CRYBB1?associated?with?autosomal?dominant?congenital?cataract?Molecular?Vision?2008；14：727-731]。

單核苷酸突變可能會對基因所編碼的蛋白質產生重要影響，晶狀體蛋白編碼基因的分子研究有助于發現潛在的患病者。到目前為止，還沒有人CRYBB1基因Q227X突變導致遺傳性白內障病的報道。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種檢測CRYBB1基因突變的方法。

本發明的第二個目的在于提供用于檢測CRYBB1基因突變的試劑盒。

本發明在一常染色體顯性遺傳的三代核性白內障家系中發現位于CRYBB1基因上第六外顯子的一個新突變Q227X。該C→T突變導致第四Greek?Key基序上的227密碼子由谷氨酸變成終止密碼子，這一突變使CYBB1蛋白被截短了26個氨基酸，從而使其理化性質和功能發生改變。經研究發現，該突變與白內障形成顯著相關。

為此，本發明第一方面，提供一種檢測人CRYBB1基因的突變的方法，其包括以下步驟：

(a)確定在樣品中人CRYBB1基因編碼的氨基酸序列的第227位氨基酸，或該基因第18458至18460位堿基；

(b)檢測該位置是否存在氨基酸Q→X的突變。

具體地，所述的突變是在SEQ?ID?NO：1第18458位核苷酸C→T的突變，使得其在此處形成終止密碼。

本發明的第二方面，提供一種分離的核酸，它具有SEQ?ID?NO.1所示的序列，且第18458位為T，或者包括第18458位核苷酸的SEQ?ID?No.1所示序列的特異性片段。

進而本發明提供一種分子標記，其為上述SEQ?ID?No.1所述的核酸序列，或者所述的特異性片段，通過該分子標記，能夠判斷其是否存在白內障患病風險。

在本發明的第三方面，提供用于擴增包括上述多態位點的特異性引物。例如，該引物其長度為15-50bp，且特異性地雜交并擴增出含人CRYBB1基因的SEQ?ID?NO.1所示序列中第18458位核苷酸C→T突變。

在本發明的第四方面，提供一種可與上述SEQ?ID?No.1特異性雜交并檢測所述多態位點寡核苷酸探針。例如，其長度為15-50bp，且特異性地雜交并檢測含人CRYBB1基因的SEQ?ID?NO：1所示序列中第18458位核苷酸C→T突變。