[發明專利]一種多表位TK1抗體的制備及其在評估腫瘤患者治療效果中的應用

有效

• 申請號: 201110353975.9
• 申請日: 2011-10-28
• 公開（公告）號: CN102516390A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 周際;李勁;斯文·斯庫格;艾倫·何
• 申請（專利權）人: 周際;李勁;斯文·斯庫格;艾倫·何
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N9/12;C07K16/02;G01N33/573;G01N33/574
• 代理公司: 北京安博達知識產權代理有限公司 11271
• 代理人: 徐國文

技術領域：

本發明涉及一種抗體及其應用，具體講涉及一種高特異性、高靈敏度多表位TK1抗體的制備及其在腫瘤患者治療效果的評估中的應用。

背景技術：

癌癥是人類的死亡殺手，盡管有許多影像檢測方法和治療手段，例如化學治療，內分泌治療，放射治療和手術等，雖然已經有了很大的進步，但遠遠不可能達到完美的程度，伴有復發和轉移的可能。

癌癥是一種細胞異常增殖的慢性疾病。癌細胞異常和失控的增殖是由于正常細胞中與增殖相關的基因發生了某種或多種突變所引起，因而準確了解腫瘤細胞增殖變化規律是評價和分析腫瘤發展方向，判斷治療效果和制定患者個體化治療方案的重要參數，但是準確檢測和動態分析腫瘤患者體內腫瘤細胞的增殖動力卻是當前腫瘤治療階段亟待解決的難題。腫瘤的治療手段主要是通過手術切除/殺傷治療/抑制治療等方法控制腫瘤組織的浸潤和轉移，例如手術治療、放射線治療、化學藥物治療、內分泌治療等方法都有清除/殺傷/干預腫瘤細胞的作用，但達不到完美的程度，需要與癌癥中細胞的增殖度來聯合評估治療效果，如DNA流式細胞分析，因設備昂貴，技術操作要求高，不能動態分析等缺陷不能實現臨床普及應用。臨床上缺乏一種能直接檢測腫瘤細胞增殖狀況，并能與手術切除/殺傷治療/抑制治療等方法同步評估腫瘤細胞增殖的直接指標和方法。現階段應用影像，超聲和腫瘤標志物檢測和評估的方法均存在分析滯后和間接判斷的問題。

對于現有許多腫瘤標志物進行回顧研究，例如CEA，CA15-3，CA199和AFP等一系列標志物，由于這類標志物不能直接反應腫瘤細胞的增殖，雖然可以監視治療效果，但它們通常是不可能用單獨一種腫瘤標志物的水平來檢測和診斷癌癥，不能準確評價腫瘤治療過程中腫瘤細胞增殖變化的狀態。

二十世紀五十年代末，研究者發現胸苷激酶(TK，ATP：thymidine?5′-phosphotransferase，EC.2.7.1.21，簡稱TK)，一種嘧啶補救途徑的酶，催化胸苷磷酸化為胸苷酸。人細胞中TK以兩種同功酶的形式出現：細胞質胸苷激酶(簡稱TK1)和線粒體胸苷激酶(簡稱TK2)。胸苷激酶1(簡稱TK1，也稱為細胞質胸苷激酶)是與細胞周期調控密切相關的細胞周期類標志物，隨后的大量基礎研究和實驗腫瘤學證明了TK1表達是與細胞生長狀態緊密聯系的，因此TK1可以作為一種好的細胞增殖標志物來檢測增殖細胞的增殖活性，因此將適用惡性腫瘤的增殖度檢測。

對血清胸苷激酶1值(STK1)進行分析，重要的是，體內正常細胞增殖不會導致血清胸苷激酶1水平的增加，因為正常的細胞分裂是按照細胞凋亡調控規律進行的，細胞內胸苷激酶1在細胞分裂之前已經被降解，但腫瘤細胞是逃逸了細胞凋亡的調控規律，導致細胞異常分裂增殖，腫瘤細胞(包括S和G2期的細胞)中的胸苷激酶1被釋放至體液。因此，在細胞過度增生的情況下，STK1水平與腫瘤細胞增殖速度相關，并與腫瘤疾病的輕重程度和治療效果有關，可用于患者的治療監視。由于在總的STK中，STK1高于95％，TK2低于5％，一種STK的活性檢測同樣用于血清學，作為一優選的腫瘤細胞增殖標志物，與STK1增強發光免疫點印跡法檢測相比現用非同位素STK的活性檢測程序，還是比較繁瑣和耗時。

采用人TK1抗體檢測STK1濃度水平更能真實代表體內是否存在異常增殖的細胞，因此，在近10多年里，按照抗體制備原理，一種TK1抗體已經試用于臨床實踐中。多個團隊制備了不同的抗TK1抗體用于腫瘤疾病的鑒定和監控，但靈敏度需要提高，也并不適用于常規人群體檢篩查。