[發明專利]一種紅外光譜測定低濃度蛋白質二級結構的方法

無效

• 申請號: 201110353783.8
• 申請日: 2011-11-10
• 公開（公告）號: CN102393379A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 吁亭;高錚亞;余紹寧
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N21/35
• 分類號: G01N21/35;G01N1/38
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.一種紅外光譜測定低濃度蛋白質二級結構的方法，其特征在于具體如下：

（1）制備氫氧化鋁-蛋白質復合物，具體步驟為：

a.?將質量濃度為2%氫氧化鋁膠體和蛋白質對應的緩沖液按體積比為1:4-1:6混合，以低轉速4000-5000rpm離心2-3分鐘；?

b.?去除上清液，用緩沖液將步驟a中得到的氫氧化鋁沉淀重懸至原濃度；

c.?將濃度為0.5mg/ml-1.5mg/ml的蛋白質和步驟b中所得的氫氧化鋁膠體按體積1:8-1:12混合，搖勻后放置室溫孵化30-40分鐘；

d.?將步驟c中所得的混合物以轉速4000--5000rpm離心2-3分鐘，去除上清液；

（2）收集譜圖：將由緩沖液洗過的氫氧化鋁膠體均勻的鋪滿蛋白質分析紅外光譜儀的6.5um固定光程的CaF₂樣品池，使用Prota數據處理軟件收集背景光譜；在相同條件下，將氫氧化鋁-蛋白質復合物均勻的鋪滿CaF₂樣品池，調節固定樣品池，使得和背景的光程一樣，收集樣品的紅外光譜圖；

（3）譜圖處理：使用Prota數據處理軟件，將氫氧化鋁-蛋白質復合物的紅外圖譜扣除氫氧化鋁膠體的背景圖譜；位于2000?cm^-1-1750?cm^-1間呈一條光滑直線作為背景扣除與否的標志,使用Prota軟件中Savitsky-Golay求導功能對蛋白質吸收光譜進行二次求導，獲得二級導數譜，并作基線修正。