[發明專利]一種象耳豆根結線蟲單根結的檢測方法與應用

有效

• 申請號: 201110350480.0
• 申請日: 2011-11-08
• 公開（公告）號: CN102367484A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: 廖金鈴;胡茂秀;卓侃
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種象耳豆根結線蟲單根結的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)設計和合成引物；

(2)培養根結線蟲，提取含有根結線蟲的單根結DNA；

(3)以含有根結線蟲的單根結DNA為模板進行PCR擴增反應；

(4)將PCR擴增反應產物進行脂糖電泳檢測；

其中，步驟(1)所述引物包括擴增根結線蟲的通用引物MF、MR和擴增象耳豆根結線蟲的特異性引物Fme和Rme；所述引物的核苷酸序列分別如表SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示。

2.根據權利要求1象耳豆根結線蟲單根結的檢測方法，其特征在于步驟(3)PCR擴增的體系為：2×PCR?buffer?12.5μl，2mmol/L?dNTPs?5μl，10μmol/L?MF?0.2μl，10μmol/L?MR?0.2μl，10μmol/L?Fme?0.6μl，10μmol/LRme?0.6μl，KOD?Fx?0.5U，DNA模板4.0μl和余量的ddH₂O，共25.0μl；

PCR擴增條件為：94℃預變性2min；94℃變性30s，64℃退火30s，68℃延伸30s，共40個循環；最后72℃后延伸5min。

3.根據權利要求1象耳豆根結線蟲單根結的檢測方法，其特征在于步驟(4)所述瓊脂糖電泳檢測是將5μl所述擴增反應產物用1％瓊脂糖電泳分離，根據條帶有無和大小獲得檢測結果。

4.權利要求1～3任一項檢測方法的應用，其特征在于應用于快速檢測植物感染象耳豆根結線蟲方面。