[發(fā)明專利]一種埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110346091.0
• 申請日: 2011-11-04
• 公開（公告）號: CN102373252A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發(fā)明（設計）人: 龔國利;陳松;李慧
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C08F222/14;C08F220/06;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/30;C12R1/645
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

1.一種埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，包括以下步驟：

1)按100ml接種1～10mg菌種的比例，將纖維堆囊菌(Sorangium?cellulosum)接種于發(fā)酵液中，然后加入菌種質(zhì)量100～800倍的特異性吸附埃博霉素B的分子印跡聚合物，在25～35℃下?lián)u床發(fā)酵96～192h；

2)發(fā)酵完成后，分離并收集發(fā)酵液中的吸附了埃博霉素B的分子印跡聚合物，然后用甲醇多次浸提，將埃博霉素B從分子印跡聚合物中分離出來，分別收集含有埃博霉素B的甲醇和分子印跡聚合物。

2.如權(quán)利要求1所述的埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的發(fā)酵液中含有黃豆粉20～50g/L、玉米淀粉5～10g/L、磷酸二氫鈉1～2g/L、磷酸氫二鈉1～2g/L、MgSO₄·7H₂O2～5g/L、FeSO₄·7H₂O?0.1～0.5g/L、CaCl₂?2～5g/L、MnCl₂?0.1～0.5g/L和葡萄糖10～15g/L，pH為7.2～7.5。

3.如權(quán)利要求1或2所述的埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，在發(fā)酵培養(yǎng)時還進行葡萄糖的補加：在發(fā)酵培養(yǎng)的第1～48h每隔30min按每100ml發(fā)酵液加入0.05～0.2g葡萄糖的比例補加，在第48h至發(fā)酵結(jié)束每隔10～15min按每100ml發(fā)酵液加入0.1～0.4g葡萄糖的比例補加。

4.如權(quán)利要求2所述的埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的發(fā)酵液中還含有土豆淀粉、葡聚糖、甘露糖中的一種，其含量為5～10g/L；

所述的發(fā)酵液中還含有蛋白胨、水解乳蛋白、玉米蛋白粉、KNO₃、NH₄SO₄中的一種作為氮源，氮源的含量為2～8g/L。

5.如權(quán)利要求1所述的埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的分子印跡聚合物的制備為：

按照埃博霉素B：功能單體∶交聯(lián)劑∶引發(fā)劑∶溶劑＝1∶(2～6)∶(20～30)∶(0.6～1)∶(3～20)的摩爾比，將上述反應原料加入到反應容器中，在攪拌下通入氮氣20～30min；然后在45～55℃下聚合反應12～24h，再在55～65℃下聚合反應8～12h；聚合反應完成后將反應產(chǎn)物破碎、研磨、過篩后得到粒徑為40～60μm的聚合反應物；

所述的功能單體為甲基丙烯酸；所述的交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙烯酸酯；

收集的聚合反應物并用水充分洗滌后，然后用乙酸∶甲醇體積比＝1∶9～3∶7的混合溶液浸提多次，脫去埃博霉素B，冷凍干燥后得到埃博霉素B的分子印跡聚合物。

6.如權(quán)利要求5所述的埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的引發(fā)劑為偶氮二異丁腈或過氧化二苯甲酰；所述的溶劑為去離子水、甲醇或乙腈。

7.如權(quán)利要求5所述的埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的搖床的轉(zhuǎn)速為100～160r/min。

8.如權(quán)利要求1所述的埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的纖維堆囊菌(Sorangium?cellulosum)為ATCC15384、ATCC25569或ATCC25531。

9.如權(quán)利要求1所述的埃博霉素B的發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的纖維堆囊菌(Sorangium?cellulosum)為經(jīng)過理化誘變、雜交、原生質(zhì)體融合或Genome?shuffling改造而篩選到的高產(chǎn)菌株。

10.一種埃博霉素B的分子印跡聚合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

按照埃博霉素B：功能單體∶交聯(lián)劑∶引發(fā)劑∶溶劑＝1∶(2～6)∶(20～30)∶(0.6～1)∶(3～20)的摩爾比，將上述反應原料加入到反應容器中，在保護氣氛下超聲振蕩20～30min，在攪拌下通入氮氣20～30min；然后在45～55℃下聚合反應12～24h，再在55～65℃下聚合反應8～12h；聚合反應完成后將反應產(chǎn)物破碎、研磨、過篩后得到粒徑為40～60μm的聚合反應物；

所述的功能單體為甲基丙烯酸；所述的交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙烯酸酯；所述的引發(fā)劑為偶氮二異丁腈或過氧化二苯甲酰；所述的溶劑為去離子水、甲醇或乙腈；

將收集的聚合反應物用水充分洗滌后，然后用乙酸∶甲醇體積比＝1∶9～3∶7的混合溶液連續(xù)洗滌，脫去埃博霉素B，冷凍干燥后得到埃博霉素B的分子印跡聚合物。