[發明專利]一種適用于PCR擴增的真菌DNA提取方法

無效

• 申請號: 201110345992.8
• 申請日: 2011-10-29
• 公開（公告）號: CN102559656A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 賈愛榮;劉昌衡;孫永軍;張永剛;孟秀梅;張綿松;胡煒;劉新;袁文鵬;夏雪奎
• 申請（專利權）人: 山東好當家海洋發展股份有限公司;山東省科學院生物研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種適合PCR擴增的真菌DNA提取方法，其特征在于：包括以下步驟：

a、培養真菌，離心，收集菌絲體；

b、將所得到的菌絲體置于研磨設備中，加入TRIS飽和酚提取液，研磨至糊狀；

c、將所得到的糊狀物轉入離心管中，加氯仿-異戊醇抽提液混勻抽提蛋白，離心，取上清液；

d、將所得到的上清液加無水乙醇沉淀，離心，收集沉淀物；

e、將所得到的沉淀物采用乙醇洗滌，干燥，溶解，即得。

2.根據權利要求1所述的一種適合PCR擴增的真菌DNA提取方法，其特征在于：其具體步驟如下：

a、采用液體培養法培養真菌約36～72小時，控制轉速為12000～15000r/min，離心5～10min，收集菌絲體；

b、將步驟a所得到濕重為0.2～0.5g的菌絲體置于研缽，加入1ml的TRIS飽和酚提取液，研磨至糊狀；其中，所述的TRIS飽和酚提取液的pH值為8.0；

c、將步驟b所得到的糊狀物轉入微量離心管中，加0.5ml的氯仿-異戊醇抽提液振蕩混勻，抽提蛋白，其中氯仿-異戊醇抽提液的體積比：25∶1；控制轉速為12000～15000r/min，離心5～10min，取上清液；

d、將步驟c所得到的上清液轉入新離心管中，加入2倍體積的預冷無水乙醇，混勻，-20℃放置1～2小時，控制轉速為12000～15000r/min，離心5～10min，收集沉淀物；

e、將步驟d所得到的沉淀物采用濃度為70～75％的乙醇漂洗2次后，控制轉速為7500～12000r/min，離心處理3～5min，然后在超凈工作臺中鼓風干燥，加50μl的無菌去離子水溶解，即得。

3.根據權利要求2所述的一種適合PCR擴增的真菌DNA提取方法，其特征在于：所述的步驟c中將所得到的糊狀物轉入微量離心管是采用尖端剪除0.5cm的吸頭轉入。