[發明專利]一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法

無效

• 申請號: 201110342969.3
• 申請日: 2011-11-02
• 公開（公告）號: CN103074391A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 曹棟;史蘇佳;曹沛
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，屬于磷脂技術領域。

技術背景

富含亞油酸的磷脂酰膽堿(DLPC)具有重要的生物學功能，研究表明多烯磷脂(PPC)能有效預防和治療肝臟疾病及肝臟纖維化，并可以預防動脈硬化引起的心血管疾病。PPC不僅影響肝臟纖維化過程，而且也可使已存在的肝臟纖維化回復，其原理是基于各種肝病均存在肝細胞膜與細胞線粒體超微結構損傷并伴磷脂丟失，細胞呼吸與能量合成不足這一中心環節，采取補充外源性磷脂使膜流動性與跨膜轉運系統活性增強，受損的細胞膜因此得以恢復；S.Lieber研究發現，肝纖維化的患者幾乎都患有B或C型肝炎，說明氧化應激和纖維化可以誘導C或B型肝炎的發生，PPC可以用來治療B或C型肝炎，預防肝纖維化和降低轉氨酶和膽紅素的濃度。2007年S.Lieber等人研究了高脂肪食物引起的脂肪性肝炎的治療效果。發現CYP2E1誘發氧應激產生大量的自由基是非酒精引起的脂肪性肝炎的主要原因，PPC具有較強的抗氧化作用，具有降低氧應激的功能。這方面進一步的研究認為PPC活性功能的發揮主要是DLPC的功能。

DLPC主要存在于大豆磷脂中，一般方法由大豆粉末磷脂分離得到的大豆磷脂酰膽堿(PC-90)，其DLPC含量在40％-50％。傳統方法要更進一步提高DLPC的含量非常困難。通過文獻檢索國內外未發現通過酶法進一步提高PC-90中DLPC含量的文獻報道。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種酶法提高DLPC含量的方法。以PC-90為原料通過酶法與亞油酸進行酸解反應，從而得到更高含量的DPLC產品。

本發明的技術方案：以大豆PC-90為原料，將原料、亞油酸和固定化脂肪酶加入到一定有機相中，進行酶法酸解反應，脫溶后通過氯仿/甲醇(2/1，V/V)提取目的產物，離心回收固定化脂肪內，脫溶，丙酮洗滌后脫溶得到較高DLPC含量的產品。

(1)原料：以大豆醇溶性磷脂為原料，要求原料中磷脂酰膽堿含量大于或等于90％，其中DLPC的含量為40％-50％；

(2)所用的有機相溶劑可以是甲苯、氯仿或者正己烷；

(3)PC-90與亞油酸質量為1∶1-1∶10；

(4)固定化脂肪酶占總底物質量百分比為5％-35％，水分添加量占酶質量的百分比為0％-10％；

(5)所用的固定化脂肪酶可以是Lipozyme?TL?IM或Novozyme?435；

(6)反應溫度為45℃-70℃，反應時間為12h-84h。

一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，所用的大豆PC-90原料來自于油廠油脂加工的副產品，并經進一步加工所得到的PC-90產品，其大豆PC含量大于或等于90％，PC-90中DLPC含量在40％-50％之間。通過將原料、亞油酸和固定化脂肪酶加入到一定有機相中，進行酶法酸解反應，脫溶后通過氯仿/甲醇(2/1，V/V)提取目的產物，離心回收固定化脂肪酶，脫溶，丙酮洗滌后脫溶得到較高DLPC含量的產品。

本發明的有益效果：一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，為制備較高高純度DLPC提供了一種可行的方法，使用該方法可以方便的制備在醫藥工業，脂質體工業及保健食品工業具有廣泛用途的較高純度DLPC產品。

表1.該方法所得產品指標

附圖說明

本發明工藝框圖。

具體實施方式

實施例1

將50gPC-90溶于100ml甲苯中，待完全溶化后加入56g亞油酸及添加有2％水的固定化脂肪酶Lipozyme?TL?IM?10.6g，混勻后于45℃條件下恒溫水浴磁力攪拌(300rpm)24h，反應結束脫溶，加入氯仿-甲醇(2/1，V/V)提取目的產物，離心(4000rpm)回收固定化脂肪酶，脫溶，丙酮洗滌后脫溶，得到35.2克DLPC含量為60.4％(HPLC歸一化法)的產品。

實施例2

將50gPC-90溶于184.2g亞油酸中，加入10ml氯仿，待完全溶解后加入添加有5％水的固定化脂肪酶Lipozyme?TL?IM?58.55g，混勻后于60℃條件下恒溫水浴磁力攪拌(300rpm)48h，反應結束脫溶，加入氯仿-甲醇(2/1，V/V)提取目的產物，離心(4000rpm)回收固定化脂肪酶，脫溶，丙酮洗滌后脫溶，得到28.2克DLPC含量為60.9％(HPLC歸一化法)的產品。

實施例3

將50gPC-90溶于166ml正己烷中，待完全溶解后加入111g亞油酸，加入添加有6％水的固定化脂肪酶Novozyme?435?32.2g，混勻后于55℃條件下恒溫水浴磁力攪拌(300rpm)36h，反應結束后脫溶，加入氯仿-甲醇(2/1，V/V)提取目的產物，離心(4000rpm)回收固定化脂肪酶，脫溶，丙酮洗滌后脫溶，得到25.3克DLPC含量為61.1％(HPLC歸一化法)的產品。