[發明專利]一種檢測熒光原位雜交質量控制的方法

無效

• 申請號: 201110341817.1
• 申請日: 2011-10-28
• 公開（公告）號: CN102433398A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 郇聘;張曉軍;趙翠;李富花;相建海
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12Q3/00
• 分類號: C12Q3/00
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種熒光原位雜交過程的質量控制方法，其特征在于：載玻片經多聚賴氨酸處理后，設置不同的DNA樣品區，將不同DNA樣品溶液分別加到其上，風干后經紫外交聯儀照射，使DNA結合到玻片上，得到簡化的染色體片，而后進行免疫檢測，通過不同區域信號的反應得出熒光原位雜交過程的質量反饋。

2.按權利要求1所述的熒光原位雜交過程的質量控制方法，其特征在于：載玻片經多聚賴氨酸處理后，分別設置待測DNA樣品(T)、陽性對照(P)、陰性對照(N)不同的DNA樣品區，將不同DNA樣品溶液分別加到其上，風干后用紫外交聯儀照射達450mJoule，使DNA結合到玻片上，得到簡化的染色體片，而后進行免疫檢測，即可分別從檢測探針質量、免疫檢測以及雜交流程方面得到相應的質量信息。

3.按權利要求1所述的熒光原位雜交過程的質量控制方法，其特征在于：針對探針質量和免疫檢測實驗中得到的結果和對策：

A.標記的探針DNA樣品(T)和陽性對照(P)位置上顯示明亮的熒光信號，未標記的DNA陰性對照(N)位置無信號時，即熒光原位雜交過程中探針質量與免疫檢測條件正常；

B.陽性對照(P)顯示信號，待測DNA樣品(T)和陰性對照(N)無信號時，即熒光原位雜交過程中探針標記失敗；需重新合成探針；

C.待測DNA樣品(T)、陽性對照(P)、陰性對照(N)均不顯示信號時，即熒光原位雜交過程中抗體失活或其他免疫檢測條件不合適；需重新制備抗體或檢查免疫檢測條件；

D.待測DNA樣品(T)、陽性對照(P)、陰性對照(N)均顯示信號，即熒光原位雜交過程中抗體發生非特異性吸附；采取的措施為降低抗體濃度、加大洗脫強度、更換抗體所用緩沖液或更換整個抗體體系。

4.按權利要求1所述的熒光原位雜交過程的質量控制方法，其特征在于：針對雜交流程的檢測實驗中得到的結果和對策：

A.與探針序列同源的DNA樣品處(T)(P)獲得了明亮的信號，無關DNA樣品(N)處則無信號時，即熒光原位雜交過程中雜交的流程正常；

B.陽性對照(P)顯示信號，已知包含探針序列的模板樣品(T)和陰性對照(N)無信號時，即熒光原位雜交過程中雜交的流程異常；需提高探針濃度或調節雜交及洗脫條件；

C.陽性對照(P)顯示信號、已知包含探針序列的模板樣品(T)和陰性對照(N)均不顯示信號時，即熒光原位雜交過程中表示抗體失活或免疫檢測條件不合適；需重新制備抗體或采用更加寬松的雜交及洗脫條件；

D.陽性對照(P)顯示信號、已知包含探針序列的模板樣品(T)和陰性對照(N)均顯示信號，即熒光原位雜交過程中出現非特異性雜交；需降低探針濃度或采取更加嚴謹的雜交及洗脫條件。

5.按權利要求1所述的熒光原位雜交過程的質量控制方法，其特征在于：所述檢測熒光原位雜交質量的方法可以適用于RNA探針及酶標抗體、組織原位雜交或整裝原位雜交中。