[發明專利]一種EGFR與HER2聯合多肽表位疫苗

無效

• 申請號: 201110340799.5
• 申請日: 2011-11-02
• 公開（公告）號: CN102357246A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 胡春萍;曹鵬;盧悟廣;蔡雪婷;王志剛;季夏蕓;胡云龍
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫藥研究院
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;C12N15/62;C07K19/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種EGFR與HER2聯合多肽表位疫苗，其特征在于，將HER家族HER2的兩 個B細胞表位模擬多肽I和II、HER家族EGFR的一個B細胞表位模擬多肽以串聯的 形式插入到乙肝核心抗原HBcAg的第78位氨基酸與第79位氨基酸之間，構成的融合 蛋白即為聯合多肽表位疫苗；

其中，所述的HER家族HER2的B細胞表位模擬多肽I，其氨基酸序列如SEQ?ID?No： 2所示，編碼該氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ?ID?No：1所示；

所述的HER家族HER2的B細胞表位模擬多肽II，其氨基酸序列如SEQ?ID?No：4 所示，編碼該氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ?ID?No：3所示；

所述的HER家族EGFR的一個B細胞表位模擬多肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?No： 6所示，編碼該氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ?ID?No：5所示；

所述的乙肝核心抗原HBcAg，其氨基酸序列如SEQ?ID?No：8所示，編碼該氨基酸 序列的核苷酸序列如SEQ?ID?No：7所示；

所述的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?No：10所示，編碼該氨基酸序列的核苷 酸序列如SEQ?ID?No：9所示。

2.權利要求1所述的EGFR與HER2聯合多肽表位疫苗的制備方法，其特征在于， 該方法包括如下步驟：

(1)使用重疊PCR技術構建融合蛋白基因；

(2)將步驟(1)得到的融合蛋白基因經雙酶切基因后與經過雙酶切消化的表達載 體pET28a連接，構建重組表達載體：

(3)將步驟(2)得到的重組表達載體轉入大腸桿菌表達系統，構建重組菌表達融 合蛋白；

(4)將步驟(3)得到的表達后的重組菌經細胞破碎，釋放出包涵體形式的融合蛋 白，洗滌后，用尿素變性，再經透析復性，獲得可溶性的融合蛋白即為EGFR與HER2 聯合多肽表位疫苗。

3.根據權利要求2所述的EGFR與HER2聯合多肽表位疫苗的制備方法，其特征 在于，步驟(1)中，所述的融合蛋白基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No：9所示，即如 SEQ?ID?No：1、SEQ?ID?No：3和SEQ?ID?No：5所示的核苷酸序列順序連接插入如SEQ ID：No：7所示的核苷酸序列的第234和第235個堿基之間。

4.根據權利要求1所述的EGFR與HER2聯合多肽表位疫苗的制備方法，其特征 在于，步驟(1)中，使用重疊PCR技術構建融合蛋白基因的具體方法如下：利用引物 P1和P2互為模板擴增出片段FI；以FI為模板，P5和P6為引物進行PCR擴增出片段 FII；以pHBc為模板，P3和P4、P7和P8為引物分別進行PCR擴增出片段FIII和FIV； 以FII、FIII為模板，P3和P6為引物進行PCR，擴增出片段FV；以FIV和FV為模板， P3和P8為引物進行PCR，擴增出融合蛋白基因。