[發明專利]一種提高2-酮基-L-古龍酸發酵強度的生產工藝

無效

• 申請號: 201110338281.8
• 申請日: 2011-11-01
• 公開（公告）號: CN102586381A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 黃建民;杜爾鳳;肖江鋒;邵麗琴;王志偉;馬華
• 申請（專利權）人: 江蘇江山制藥有限公司
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P7/60;C12R1/01;C12R1/11
• 代理公司: 靖江市靖泰專利事務所 32219
• 代理人: 陸平

技術領域：

????本發明涉及維生素C的制備方法，屬于微生物發酵技術領域，特別是涉及到一種提高2-酮基-L-古龍酸發酵生產效率的新工藝。

背景技術：

2－酮基－L－古龍酸(以下簡稱2-KLG)，是合成維生素C重要的組成部分。目前國內主要維生素C生產廠家均采用?“二步發酵法”生產工藝，這一技術的關鍵步驟是其第二步發酵過程：L-山梨糖在普通生酮基古龍酸菌（行業內俗稱小菌）和巨大芽孢桿菌（行業內俗稱大菌）組成的混合菌系作用下被生物氧化為2-KLG。國內的維生素C“二步發酵法”與國外“萊氏法”相比，簡化了工藝，降低成本，減少了污染，但由于目前學術界還未完全透徹理解第二步發酵過程中的大小菌生理關系，在實際生產中仍存在周期長、能耗高等制約生產效率的技術問題，因此，改進原有發酵生產工藝，提高2-酮基-L-古龍酸發酵生產效率是非常重要的。

發明內容：

???本發明通過分階段和補料培養的研發來調整2-酮基-L-古龍酸發酵中雙菌生理關系，使得環境和營養條件有利于促進巨大芽孢桿菌和普通生酮基古龍酸菌混菌系細胞生長，從而有效提高混菌系生物合成2-KLG的速率，達到提高發酵生產效率的目的。

一種提高2-酮基-L-古龍酸發酵生產效率的新工藝，其特征在于：加工步驟如下

1）??..菌種的選擇

普通生酮基古龍酸菌和巨大芽孢桿菌；

2）.?培養基，以重量單位百分比配比如下，

固體培養基：山梨糖1.5?，?酵母膏?0.2，玉米漿?0.5，尿素0.2?MgSO₄·7H₂O?0.03，?KH₂PO_4?0.02?，CaCO₃?0.5，瓊脂?2.5，?pH?7.0?；

液體種子培養基：山梨糖1.5?，?酵母膏?0.3，玉米漿?0.5，尿素0.2?，MgSO₄·7H₂O?0.01，?KH₂PO_4?0.02?，CaCO₃?0.5，?pH?7.0；

發酵初始培養基：山梨糖初始含量2?，玉米漿?0.8～1.1，尿素0.1～0.2?，MgSO₄·7H₂O?0.02，?KH₂PO_4?0.05?，初始?pH6.7～7.0?，其中流加山梨糖濃度25%，初始山梨糖與其它培養基分開滅菌；

3）、搖瓶種子培養

培養溫度29℃，培養時間為24小時，搖床轉速190rpm；

4）、發酵罐分階段補料和控制工藝

????培養0～32小時期間，溫度控制28～33℃；培養32小時至發酵結束，溫度控制34～38℃；培養至16～20小時期間，補加0.2～0.5%玉米漿?；培養至28～32小時期間，補加0.1～0.35%尿素。

本發明通過發酵罐分階段控制和補料工藝，發酵過程中?2-KLG的生物合成速率比原加工方法提高了22.17%，能有效提高2-KLG發酵生產效率，節約生產成本。簡化了工藝，減少了污染，克服了生產周期長、能耗高的缺陷。

具體實施方式：

實施例1：

對照組：將培養好的普通生酮基古龍酸菌和巨大芽孢桿菌的混合菌液1升，接入到3.5升含有2%的山梨糖、1.1%玉米漿、0.2%尿素、0.02%硫酸鎂、0.05%磷酸二氫鉀的發酵培養基中，發酵容器采用10升自動發酵罐，攪拌轉速400rpm，通氣比1:1vvm，培養基初始PH6.7，培養8小時開始用25%碳酸鈉溶液控制發酵液PH7.0，培養10小時開始流加濃度為25%的山梨糖溶液，控制發酵最終總糖濃度10.2%，溫度控制30℃；發酵液終點2-酮基-L-古龍酸含量99.26mg/ml，發酵周期52小時，產酸速率1.91mg/ml·h。