[發明專利]重組人寡腺苷酸合成酶-1的制備方法

有效

• 申請號: 201110337751.9
• 申請日: 2011-10-31
• 公開（公告）號: CN102358897A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 周敏毅;李孜;徐晨;劉金毅;程永慶
• 申請（專利權）人: 北京三元基因工程有限公司;北京畢艾歐科技發展有限責任公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/63;C12N15/54
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明一般的涉及重組人寡腺苷酸合成酶的制備方法，特別的涉及重組人寡 腺苷酸合成酶-1的制備方法。

背景技術

慢性病毒性肝炎(HBV)是全球性的重大疾病，每年有50-120萬人死于該 病及由其引起的肝硬化和肝癌等。作為一線藥物，雖然干擾素α(interferonα， IFNα)在HBV的治療中具有抗病毒及免疫調節的雙重作用，但臨床上只有 25％-50％的HBV患者使用IFNα治療有效。因此如何在早期通過IFNα作用原理 預測IFNα治療HBV的療效，從而確定IFNα適宜治療HBV患者的對象，正確 指導臨床用藥就顯得十分關鍵。

2’，-5’寡腺苷酸合成酶(2’，5’-Oligoadenylate?synthetase，OAS)，簡稱寡腺苷 酸合成酶(OAS)，是Kerr等在IFNα處理過的細胞提取液中發現的酶。經研究 發現OAS的激活或生成是IFNα在治療HBV的過程中發生藥理作用的重要信號 通路，因此其高低水平可用于判斷IFNα是否適宜于特定HBV患者的治療。

IFNα處理人細胞，主要誘導產生OAS1(40/46kDa)、OAS2(69/71kDa)和 OAS3(100kDa)三種類型OAS蛋白。在OAS1、OAS2、OAS3基因的5’區域， 包含一個干擾素激活反應元件(ISRE)。

OAS1有兩種亞型，分子量分別為40和46kDa，均具有相同的N端346個 氨基酸，稱為一個OAS單位。40kDa?OAS1C末端包含18個氨基酸，而46kDa 蛋白則有54個氨基酸的延伸。

OAS2有分子量分別為69和71kDa的兩種亞型，它們N端有683個氨基酸 的同源序列，包含兩個OAS單位，與OAS1的346個氨基酸OAS單位相比，分 別有41％和53％的同源性，分別還有4和44個不同氨基酸序列延伸。干擾素劑 量依賴性誘導，至少可能產生4.5、3.9、3.3、2.8kb四種mRNA轉錄形式。其中 3.3kb?mRNA編碼71kDa?OAS2，其他三種具有不同的3’末端，但同樣編碼69kDa OAS2。

與OAS1和OAS2不同的是，OAS3由7kb大小的mRNA編碼，只有一種 亞型，包含三個OAS單位，與OAS1相比，有42％，47％和60％的同源性。

OAS基因家族簇生于人12號染色體上的一段130kb的區域內，它們具有相 同的轉錄方向，按照5’-OAS1-OAS3-OAS2-3’的順序排布。同時，在人12 號染色體上還存在一段編碼P59大小，與OAS1序列具有同源性的蛋白，該蛋白 與OAS1和OAS2均可以和抗OAS3多克隆抗體發生交叉抗原抗體結合反應。但 是該蛋白沒有催化活性，稱為OAS類似蛋白(OASL)。

雖然，IFNα可誘導產生各種類型的OAS蛋白，但是，在不同的細胞中，可 能存在不同的細胞因子調節各種類型及其亞型的表達，所以各類型及其亞型存在 表達差異。但是總體來說，OAS1在三種類型的OAS中在人體內表達量是最高 的，分布也是最廣的。

在IFNα和細胞膜上的受體作用下，細胞合成大量無活性的OAS，當有雙鏈 RNA或者具有微二級結構的單鏈RNA存在時，OAS被激活而具有催化活性， 它以ATP為底物，催化合成2’-5’寡腺苷酸(2-5A)，2-5A特異性結合并激活 核酸內切酶(RNAse?L)降解病毒的mRNA及細胞的RNA，從而發揮抗病毒的 作用。臨床研究表明通過在用藥前后檢測OAS活性在一定程度上可以預測患者 使用IFN治療的療效，從而指導臨床合理用藥。

目前OAS的活性檢測多采用放射免疫的方法，但該方法存在繁瑣、費時、 花費高的缺點，因此在臨床推廣應用上有一定的困難。而采用ELISA的方法， 則可克服這些缺點，從而可通過檢測患者體內OAS含量水平而推算體內OAS活 性，從而為IFNα的臨床用藥提供切實的依據。