[發明專利]重組人寡腺苷酸合成酶-1的制備方法

有效

• 申請號: 201110337751.9
• 申請日: 2011-10-31
• 公開（公告）號: CN102358897A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 周敏毅;李孜;徐晨;劉金毅;程永慶
• 申請（專利權）人: 北京三元基因工程有限公司;北京畢艾歐科技發展有限責任公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/63;C12N15/54
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種OAS1蛋白的制備方法，其特征是依次包括如下步驟：

1）化學合成OAS1蛋白基因表達序列；

2）用適宜的表達載體和上述OAS1蛋白表達基因序列構建重組表達載體，并將重組表達載體通過適宜的手段轉入基因工程工程菌構建表達OAS1蛋白的重組工程菌；

3）發酵培養上述重組工程菌，通過適宜的方式產生包涵體形式表達的OAS1；

4）對發酵培養收獲的工程菌進行破碎處理后獲得包涵體，對包涵體依次用含從低到高濃度的1-8mol/L的尿素的溶液進行洗滌，含每種濃度的尿素的溶液洗滌1次，共洗滌2-4次后用含6-8mol/L鹽酸胍與同下步陽離子交換層析相同緩沖溶液體系的溶液進行變性處理；

5）變性液上陽離子交換層析柱進行純化處理，洗脫后得到純度在95%以上的OAS1變性蛋白。

2.如權利要求1制備方法，其特征是在用含從低到高濃度的1-8mol/L的尿素的溶液進行洗滌時至少先用含1-2?mol/L的低濃度的尿素溶液洗滌1次，洗滌時間0.5-2小時，并最后用含6-8mol/L的高濃度的尿素溶液洗滌1次，洗滌時間0.2-0.5小時，各步的洗滌時間隨著洗滌溶液中尿素濃度的提高而縮短。

3.如權利要求2制備方法，其特征是在用含1-2?mol/L的低濃度的尿素溶液洗滌與在用含6-8?mol/L的高濃度的尿素溶液洗滌之間還有1-2步含中間濃度的尿素溶液的洗滌。

4.如權利要求1的制備方法，其特征是所述的含從低到高濃度的1-8mol/L的尿素的溶液中還含有去垢劑、螯合劑和/或還原劑。

5.如權利要求4的制備方法，其特征是所述的去垢劑為SDS、Triton?X-100、吐溫20、吐溫80、NP-40中的一種或幾種的組合。

6.如權利要求4的制備方法，其特征是所述的螯合劑為EDTA、EGTA中的一種或兩種的組合。

7.如權利要求4的制備方法，其特征是所述的還原劑為二硫蘇糖醇、巰基乙醇、半胱氨酸中的一種或幾種的組合。

8.如權利要求1-7之一的制備方法，其特征是對陽離子交換層析純化得到的變性狀態下的OAS1蛋白進一步進行復性及復性后的純化處理。

9.如權利要求1-7之一的制備方法，其特征是所述發酵培養選擇自動誘導培養基。