[發明專利]一種新的shRNA表達載體及其構建方法與應用無效
| 申請號： | 201110331036.4 | 申請日： | 2011-10-27 |
| 公開（公告）號： | CN102533826A | 公開（公告）日： | 2012-07-04 |
| 發明（設計）人： | 王升啟;王學軍;李英;胡偉;李丹丹;張秀娟;謝佩雯 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/63 | 分類號： | C12N15/63;C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100850 北京市海*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 shrna 表達 載體 及其 構建 方法 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種用于shRNA介導基因沉默的shRNA構建載體。其特征在于：
采用PIII型H1啟動子并對其3’端進行了突變使其最后3-5個堿基均改變為T；
含有兩個SapI(或BspMI，BbvII，BsmI)酶切位點進行shRNA構建。
2.一種shRNA的克隆方法，包括僅需合成兩條短鏈或者一條長鏈寡核苷酸片段，在退火后自身互補配對而形成長雙鏈DNA片段后，插入用限制性內切酶酶切得到的線性化的載體，得到環形的DNA分子。隨后將環狀DNA分子轉化細菌，通過篩選得到正確的基因克隆。
3.根據權利要求2所述的shRNA克隆方法，其特征在于兩條短鏈或者一條長鏈寡核苷酸片段，兩條同種鏈在自身退火后能夠形成長雙鏈寡核苷酸片段。
4.根據權利要求2所述的shRNA克隆方法，其特征在于，退火形成的DNA片段能夠和權利要求1中的酶切后載體通過互補的粘性末端連接。
5.根據權利要求1所述的載體和權利要求2所述的方法，其構建的shRNA采用具有回文序列的環序列。
6.一種基因治療載體，其特征在于含有權利要求1中shRNA結構相連的表達調控序列以及權利要求2中的shRNA結構。
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