[發明專利]一種檢測EGFR基因突變的方法及試劑盒

無效

• 申請號: 201110330795.9
• 申請日: 2011-10-27
• 公開（公告）號: CN102367479A
• 公開（公告）日: 2012-03-07
• 發明（設計）人: 肖莉;陳琳玲;廖端芳;姬云;張佳;李凱
• 申請（專利權）人: 蘇州科貝生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

1.一種檢測EGFR基因突變的試劑盒，包括：常規PCR組件，其特征在于，還包括特異性引物；所述特異性引物包括兩條正向引物和一條反向引物，并且每一條正向引物的三末端第二個、第三個堿基為硫化修飾堿基；其中三條正向引物的序列分別具有SEQ?ID?No.1、SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列，所述反向引物具有SEQ?ID?No.3所示核苷酸序列；所述特異性引物的核苷酸序列具體如下所示：

SEQ?ID?No.1：5’TTCCCGTCGCTATCAAAACC-3’；

SEQ?ID?No.2：5’-CGTCGCTATCAAGGAATCGAT-3’；

SEQ?ID?No.3：5’-AGTGCTGTCTCTAAGGGGC-3’；

所述常規PCR組件包括：高保真DNA聚合酶Pfu酶，含有硫酸鎂的Pfu緩沖液，dNTPs。

2.采用權利要求1所述檢測EGFR基因突變的試劑盒檢測待測樣本是否存在EGFR基因突變的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)采用常規方法提取待測組織樣本基因組DNA；

(2)以步驟(1)所得樣本基因組DNA為模板，采用特異性引物進行多重PCR擴增，根據PCR擴增的結果判斷樣本中是否含有EGFR基因的突變，所述基因的突變包括：15nt缺失突變和18nt缺失突變；判斷規則為：如果出現擴增產物235bp，則表明樣本中含有上述15nt缺失突變；如果出現擴增產物228bp，則表明樣本中含有上述18nt缺失突變；如果沒有出現擴增產物，則表明樣本中不含上述2個缺失突變中的任意一種。

3.根據權利要求2所述檢測EGFR基因突變的試劑盒檢測待測樣本是否存在EGFR基因突變的方法，其特征在于，進行多重PCR擴增時，每25μL的多重PCR擴增體系包括：1μL樣本基因組DNA，2.5μL?10×含有硫酸鎂的Pfu緩沖液，1μL反向引物，兩條正向引物各0.5μL，0.2μLPfu酶，0.4μLdNTPs，剩下加水補足；多重PCR反應條件為：95℃預變性5分鐘，95℃變性20秒，68℃退火20秒，退火溫度每個循環遞減1℃，72℃延伸30秒，共10個循環；95℃變性20秒，55℃退火20秒，72℃延伸30秒，共35個循環，最后72℃延伸10分鐘。

4.如SEQ?ID?No.1所述的核苷酸序列。

5.如SEQ?ID?No.2所述的核苷酸序列。

6.如SEQ?ID?No.3所述的核苷酸序列。