[發明專利]檢測組織或細胞中可溶性表氧化物水解酶活性的試劑

有效

• 申請號: 201110330608.7
• 申請日: 2011-10-26
• 公開（公告）號: CN102608081A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 朱毅;劉燕;何金龍;李楠
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京市漢信律師事務所 11373
• 代理人: 王文生

1.一種檢測組織或細胞中可溶性表氧化物水解酶活性的試劑，由裂解液、檢測緩沖溶液、檢測底物溶液和sEH抑制劑溶液組成；通過下述方法制備得到：

裂解液包括低滲溶液和苯甲基磺酰氟溶液，其中：

低滲溶液為去離子水，或按如下配制：

將三羥甲基氨基甲烷55-65毫克、氯化鎂15-25毫克、乙二醇二乙醚二胺四乙酸35-40毫克、乙二胺四乙酸3-5毫克溶解于水中，調節pH至7.0-7.5，水定容至100ml；

苯甲基磺酰氟溶液：將苯甲基磺酰氟溶于異丙醇中，濃度為100mM；

苯甲基磺酰氟溶液與低滲溶液的體積比為1/1000～1/100；

檢測緩沖溶液：將三羥甲基氨基甲烷溶解至水中，濃度為50mM，調節pH至6.8-7.3，加入牛血清白蛋白溶解，牛血清白蛋白的加入量為0.1-0.3mg/ml；

檢測底物溶液：將Epoxy?Fluor?7溶解至二甲基亞砜中配成5mM的溶液；

sEH抑制劑溶液：將sEH抑制劑溶解至二甲基亞砜中，配成10mM的溶液。

2.根據權利要求1所述的試劑，其中，低滲溶液為去離子水。

3.根據權利要求1所述的試劑，其中，所述sEH抑制劑為12-(3-金剛烷-1-基-脲基)-正十二烷酸、反式-4-[4-(3-金剛烷-1-基-脲基)-環己氧基]-苯甲酸或1-(1-甲磺酰哌啶-4-基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)-尿素。

4.權利要求1所述試劑的制備方法，其主要包括：

1)制備裂解液，所述裂解液包括低滲溶液和苯甲基磺酰氟溶液：

低滲溶液為去離子水，或按如下配制：

將三羥甲基氨基甲烷55-65毫克、氯化鎂15-25毫克、乙二醇二乙醚二胺四乙酸35-40毫克、乙二胺四乙酸3-5毫克溶解于水中，調節pH至7.0-7.5，水定容至100ml，存放于4℃；

2)苯甲基磺酰氟溶液：將苯甲基磺酰氟溶于異丙醇中，濃度為100mM，存放于-20℃至4℃；

苯甲基磺酰氟溶液與低滲溶液的體積比為1/1000～1/100；

3)檢測緩沖溶液：將三羥甲基氨基甲烷溶解至水中，濃度為50mM，調節pH至6.8-7.3，加入牛血清白蛋白溶解，牛血清白蛋白的加入量為0.1-0.3mg/ml，存放于4℃；

4)檢測底物溶液：將Epoxy?Fluor?7溶解至二甲基亞砜中配成5mM的溶液，存放于-20℃；

5)sEH抑制劑溶液：將sEH抑制劑溶解至二甲基亞砜中，配成10mM的溶液，存放于-20℃。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其中，低滲溶液為去離子水。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其中，所述sEH抑制劑為12-(3-金剛烷-1-基-脲基)-正十二烷酸、反式-4-[4-(3-金剛烷-1-基-脲基)-環己氧基]-苯甲酸或1-(1-甲磺酰哌啶-4-基)-3-(4-三氟甲氧基苯基)-尿素。