[發明專利]EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用

無效

• 申請號: 201110329338.8
• 申請日: 2011-10-26
• 公開（公告）號: CN102392003A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 邢苗;劉森林;陳偉釗;杜坤
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/26;C12R1/19
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用。

背景技術

大腸桿菌表達系統是現今實驗室應用甚至工業生產應用最早、最為廣泛的表達系統。其本身天然的特點賦予其巨大的應用價值，這些特點包括：(1)其全基因組測序完成，遺傳背景非常詳細；(2)基因克隆表達系統成熟完善；(3)繁殖迅速、培養簡單、操作方便、遺傳穩定；(4)細胞本身表達蛋白組分少、表達量低，易于純化回收外源重組蛋白；(5)被美國FDA批準為安全的基因工程受體生物。

大腸桿菌由于其特殊的細胞壁結構所形成的滲透屏障，嚴重阻礙了它的工業生產應用，主要的限制因素有：(1)外源重組蛋白只能在胞內表達，無法分泌到細胞外；(2)外源重組蛋白在胞內表達過程中易形成無活性的包涵體，嚴重降低重組蛋白的活性質量；(3)外源重組蛋白表達量總體偏低。因此，實現大腸桿菌表達系統的胞外分泌同時提高其表達水平具有重要的工業應用價值。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種EDTA(乙二胺四乙酸)在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，是基于發現EDTA具有提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量的性能所得到的技術方案；

所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，具體包含以下步驟：用誘導劑對含有重組載體的大腸桿菌進行誘導培養，加入EDTA或是加入EDTA和溶菌酶繼續培養即可；

所述的重組載體優選為將核苷酸序列如下所示的堿性內切葡聚糖酶基因III-3-a克隆到原核表達載體pET-28a(+)中得到的重組載體pET-28a-III-3-a或是將核苷酸序列如下所示的淀粉酶基因克隆到原核表達載體pET-28a(+)中得到的重組載體pET-28a-III-A；

堿性內切葡聚糖酶基因III-3-a的序列如下所示：

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