[發明專利]EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用

無效

• 申請號: 201110329338.8
• 申請日: 2011-10-26
• 公開（公告）號: CN102392003A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 邢苗;劉森林;陳偉釗;杜坤
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/26;C12R1/19
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用。

2.根據權利要求1所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于包含以下步驟：用誘導劑對含有重組載體的大腸桿菌進行誘導培養，加入EDTA或是加入EDTA和溶菌酶繼續培養；所述的大腸桿菌指的是用于作為宿主菌的大腸桿菌。

3.根據權利要求2所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于：所述的重組載體為將核苷酸序列如SEQ?ID：No.1所示的堿性內切葡聚糖酶基因III-3-a克隆到原核表達載體pET-28a(+)中得到的重組載體pET-28a-III-3-a或是將核苷酸序列如SEQ?ID：No.2所示的淀粉酶基因克隆到原核表達載體pET-28a(+)中得到的重組載體pET-28a-III-A。

4.根據權利要求2所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于：

所述的誘導劑為IPTG；

所述的誘導培養的條件為23～37℃培養。

5.根據權利要求4所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于：

所述的IPTG的使用條件為含有重組載體的大腸桿菌處于對數生長期時加入IPTG，IPTG的終濃度為0.2～1.0mmol/L。

6.根據權利要求2所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于：所述的大腸桿菌為大腸桿菌E.coli?BL21Star(DE3)。

7.根據權利要求2所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于：所述的EDTA的加入時間為含有重組載體的大腸桿菌處于對數生長期；

所述的EDTA和溶菌酶的加入時間為含有重組載體的大腸桿菌處于對數生長期。

8.根據權利要求1～7任一項所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于包含以下步驟：

(1)將含有重組載體的大腸桿菌培養至OD₆₀₀為0.6時，加入IPTG于23℃、250r/min誘導培養，IPTG的終濃度為0.2mmol/L；

(2)誘導培養至第4～20h時加入EDTA，或是加入EDTA和溶菌酶；EDTA的終濃度為質量體積比0.2～1％，溶菌酶的終濃度為0.05～0.25mg/L；

(3)繼續培養至菌體處于穩定期后期，收集上清。

9.根據權利要求8所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于：步驟(2)為：誘導培養至第12h時加入EDTA，或是加入EDTA和溶菌酶；EDTA的終濃度為質量體積比5％，溶菌酶的終濃度為0.15mg/L。

10.根據權利要求8所述的EDTA在提高大腸桿菌重組蛋白胞外分泌量和表達量中的應用，其特征在于：步驟(3)為：繼續培養18～25小時，收集上清。