[發(fā)明專利]革蘭氏陰性菌滅活疫苗、其制備方法及應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110327696.5
• 申請(qǐng)日: 2011-10-25
• 公開（公告）號(hào): CN102382872A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白同臣;曲海波;孟福強(qiáng);趙輝;王華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司
• 主分類號(hào): C12P21/02
• 分類號(hào): C12P21/02;A61K39/108;A61P31/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費(fèi)碧華

1.氨芐青霉素鈉在誘導(dǎo)革蘭氏陰性菌產(chǎn)生類志賀變異體二型毒素中的應(yīng)用，優(yōu)選的所述革蘭氏陰性菌為致仔豬水腫病大腸桿菌。

2.氨芐青霉素鈉在制備革蘭氏陰性菌滅活疫苗中的應(yīng)用。

3.一種革蘭氏陰性菌滅活疫苗的制備方法，其特征在于將單株或多株革蘭氏陰性菌分別接種于含氨芐青霉素鈉的營(yíng)養(yǎng)肉湯中，培養(yǎng)，經(jīng)純粹檢查合格后作為制苗用菌液，菌液經(jīng)滅活后制備成單價(jià)或多價(jià)滅活疫苗，優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基中含有的氨芐青霉素鈉的濃度為5μg/ml。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于具體的，包括以下步驟：

(1)一級(jí)菌種繁殖

將單株或多株凍干革蘭氏陰性菌菌種分別接種營(yíng)養(yǎng)肉湯，36～37℃培養(yǎng)16-20小時(shí)后，用劃線分別接種于麥康凱瓊脂平板，置36～37℃培養(yǎng)16～20小時(shí)，在低倍鏡下，分別選取菌落5-10個(gè)混合接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯，然后分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，置36～37℃培養(yǎng)16～20小時(shí)，用營(yíng)養(yǎng)肉湯分別洗下菌種加10％(w/w)甘油，-20℃保存，使用期不超過(guò)6個(gè)月或斜面培養(yǎng)物置2～8℃保存，不超過(guò)1個(gè)月，純粹檢驗(yàn)合格，作為一級(jí)種子；

(2)二級(jí)菌種繁殖

取一級(jí)種子分別接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯，置36～37℃震蕩培養(yǎng)16～20小時(shí)，取樣作純粹檢查，純粹檢查合格后，置2～8℃保存；

(3)菌液培養(yǎng)

用玻瓶或生物發(fā)酵罐通氣培養(yǎng)，將二級(jí)菌種分別接種于含5μg/ml氨芐青霉素鈉的營(yíng)養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)16～18h，經(jīng)純粹檢查合格后作為制苗用菌液；

(4)菌液滅活

得到的菌液以總量0.4％(w/w)加入戊二醛溶液，經(jīng)37℃滅活48小時(shí)；所述的菌液為單株革蘭氏陰性菌菌液或多株革蘭氏陰性菌菌液的混合物，按活菌計(jì)數(shù)，將各菌株菌液按1∶1∶1比例混合；

(5)疫苗的制備

在檢驗(yàn)合格的滅活菌液中加入終濃度為20％(w/w)的氫氧化鋁凝膠和0.005％(w/w)的硫柳汞防腐，制備濃縮滅活疫苗，按滅活前活菌數(shù)計(jì)算，制備濃縮滅活疫苗含單株菌數(shù)均不低于100×10⁸CFU/ml。

5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述的革蘭氏陰性菌為致仔豬水腫病大腸桿菌。

6.由權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的方法制備得到的革蘭氏陰性菌滅活疫苗。

7.如權(quán)利要求6所述的滅活疫苗，其特征在于所述的疫苗為仔豬水腫病滅活疫苗。

8.如權(quán)利要求7所述的滅活疫苗，所述的疫苗為仔豬水腫病多價(jià)滅活疫苗。

9.權(quán)利要求6所述的滅活疫苗在制備治療由感染革蘭氏陰性菌引起的疾病藥物中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求7或8所述的滅活疫苗在制備治療豬水腫病藥物中的應(yīng)用。