[發明專利]用于篩選抗血管損傷藥物的斑馬魚血管損傷模型及其建立方法和應用

有效

• 申請號: 201110327420.7
• 申請日: 2011-10-25
• 公開（公告）號: CN102499135A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 李銘源;黎晌;許貝文
• 申請（專利權）人: 澳門大學
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00;A61K49/00;G01N21/64;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 周端儀

1.一種斑馬魚血管損傷模型的建立方法，其特征在于包括以下順序步驟：

(1)取受精后24-28小時大的轉基因或野生型的斑馬魚胚胎拆蛋殼后；

(2)加入濃度為100～600nM/L的血管生長因子受體抑制劑，造模3-4小時；

(3)清洗掉血管生長因子受體抑制劑，得到斑馬魚血管損傷模型。

2.根據權利要求1所述的斑馬魚血管損傷模型的建立方法，其特征在于：所述的步驟(1)所述的野生型為AB品系，所述的轉基因斑馬魚為Tg(fli-1：EGFP)。

3.根據權利要求2所述的斑馬魚血管損傷模型的建立方法，其特征在于：所述步驟(2)中的血管生長因子受體抑制劑為血管生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑。

4.根據權利要求1所述的斑馬魚血管損傷模型的建立方法，其特征在于：所述步驟(2)用血管生長因子受體抑制劑造模時，血管生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑的濃度為300-600nM/L。

5.根據權利要求1所述的斑馬魚血管損傷模型的建立方法，其特征在于：所述步驟(2)所用的血管生長因子受體抑制劑加入二甲基亞砜(溶媒)助溶，二甲基亞砜的質量百分比濃度不大于1％。

6.根據權利要求1所述的斑馬魚血管損傷模型的建立方法，其特征在于：所述步驟(3)用純凈去離子水清洗掉抑制劑，最少清洗2遍。

7.一種用于篩選抗血管損傷藥物的斑馬魚血管損傷模型，其特征在于：所述模型由權利要求1-6中任一權利要求所述方法制得。

8.一種篩選抗血管損傷藥物的方法，其特征在于包括以下順序步驟：

(1)采用權利要求7所述的斑馬魚血管損傷模型作為空白對照組及受試藥物組，取正常生長的且生長時間相同的斑馬魚胚胎為正常對照組，每組斑馬魚數量相等為5-15條；將所配好濃度的受試藥物加入到受試藥物組的水溶液(胚胎培養基)中，正常對照組和空白對照組則加入等量的溶媒的胚胎培養基；

(2)給藥24，48，72小時分別用熒光顯微鏡觀察血管的形態，并且在給藥24小時檢測斑馬魚組織中血管內皮生長因子受體(Flk-1A，Flk1-B，Flt1)基因表達的水平的變化。

9.根據權利要求8所述的篩選抗血管損傷藥物的方法，其特征在于：所述步驟(2)采用實時定量鏈式反應(Quantitative?real-time?PCR)檢測斑馬魚組織中血管內皮生長因子受體(Flk-1A，Flk1-B，Flt1)基因表達。

10.根據權利要求8所述的篩選抗血管損傷藥物的方法，其特征在于：所述步驟(1)的受試藥物為化學藥品、中藥提取物、中藥中的單體化合物、中藥復方或它們的組合物。